@article { author = {popzan, zahra and SHahpiri, Azar}, title = {Comparison of Reduction Activity of three Rice (Oryza sativa) Thioredoxin Isoforms in Reaction with Insulin}, journal = {Agricultural Biotechnology Journal}, volume = {4}, number = {1}, pages = {35-48}, year = {2012}, publisher = {Shahid Bahonar University of Kerman and Iranian Biotechnology Society}, issn = {2228-6705}, eissn = {2228-6500}, doi = {10.22103/jab.2012.466}, abstract = {Thioredoxins (Trxs) are ubiquitous, low-molecular-mass proteins with two cysteins in their active site WC(G/P)PC which are involved in reversible reduction of disulfide bonds. Plants contain several forms of Trxs. Thioredoxin f, m, x and y are found in the chloroplast, Trxo is localized in mitochondria and Trxh is typically cytosolic. Trxh isoforms play important roles in plants development. In this study, we describe isolation and cloning of three cDNAs encoding different Trx h isoforms, stated OsTrx1, OsTrx20 and OsTrx23. Three Trx h were heterologously expressed in Rosetta (DE3) - a strain of Escherichia coli. After inducing T7 promoter with IPTG, proper amount of recombinant proteins were produced. The recombinant proteins were purified by affinity chromatography. The recombinant Trxh isoforms were analyzed for their ability to reduce Insulin – an electron receptor substrate for Trxs- and DTT, as a primary reducing agent. All three isoforms were active, but the rate of reduction varied among different reactions. The existence of observed variations can reveal different functions for thioredoxins in plant system.  }, keywords = {: Rice,Thioredoxin,cloning,Heterologous protein expression,Insulin,Reduction activity}, title_fa = {مقایسه فعالیت احیایی سه ایزوفرم‌ تیوردوکسین گیاه برنج (Oryza sativa) در واکنش با انسولین}, abstract_fa = {تیوردوکسین‌ها (Trxs) پروتئین‌هایی با وزن مولکولی 14-12 کیلودالتون هستند که با داشتن یک گروه تیول-دی سولفید در جایگاه فعالشان (WCG/PPC)، در احیاء برگشت‌پذیر پیوندهای دی‌سولفیدی نقش دارند. ایزوفرم‌های مختلفی از Trx در گیاهان وجود دارند. ایزوفرم‌های f، m، x و y در کلروپلاست، ایزوفرم o در میتوکندری و ایزوفرم h در سیتوزول یافت می شوند. Trx h دارای اهمیت اساسی در رشد و نمو گیاه است. در پژوهش حاضر، توالی ژن های کد کننده‌ی سه ایزوفرم Trx h از گیاه برنج، با نام های OsTrx1، OsTrx20 و OsTrx23 جداسازی و همسانه سازی شدند. جهت تولید پروتئین نوترکیب، ژن ها در پلاسمید بیانی pET-15b، همسانه سازی و سپس به سویه‌ی مناسبی از باکتری  اشریشیا کلی به نام Rosetta (DE3) منتقل شدند. با تحریک پروموتر T7 به وسیله­ی IPTG، میزان مناسبی از پروتئین‌های نوترکیب تولید و با استفاده از روش کروماتوگرافی جذبی خالص‌سازی شدند. فعالیت احیایی سه ایزوفرم نوترکیب تولید شده با استفاده از انسولین به عنوان سوبسترای الکترون گیرنده و DTT به عنوان عامل احیا کننده اولیه مورد مقایسه قرار گرفت. هر سه ایزوفرم نوترکیب تولید شده فعال و قادر به احیای انسولین بودند. با این حال سرعت احیای انسولین در واکنش ها کاملا متفاوت بود که می تواند منعکس کننده تفاوت در فعالیت این ایزوفرم‌ها در گیاه و در نتیجه احتمال تفاوت در نقش آن ها  نیز باشد}, keywords_fa = {برنج,تیوردوکسین,همسانه‌سازی,بیان هترولوگ پروتئین,انسولین,فعالیت احیایی}, url = {https://jab.uk.ac.ir/article_466.html}, eprint = {https://jab.uk.ac.ir/article_466_255519aa242bc7a493f4c5cbccebd36b.pdf} }