%0 Journal Article %T تکثیر و همسانه‌سازی‌ ژن آلفا‌توکسین باکتری کلوستریدیوم پرفرینجنس در باکتری E. coli %J مجله بیوتکنولوژی کشاورزی %I دانشگاه شهید باهنر کرمان (دانشکده کشاورزی و پژوهشکده فناوری تولیدات گیاهی) و انجمن بیوتکنولوژی جمهوری اسلامی ایران %Z 2228-6705 %A ساسان, حسینعلی %A رسانی, مهین %A کارآموز, سمانه %A اسماعیلی زاده کشکوئیه, علی %A اسدی فوزی, مسعود %A آیت اللهی مهرجردی, احمد %D 2020 %\ 02/20/2020 %V 11 %N 4 %P 67-86 %! تکثیر و همسانه‌سازی‌ ژن آلفا‌توکسین باکتری کلوستریدیوم پرفرینجنس در باکتری E. coli %K آلفاتوکسین %K کلستریدیوم پرفرینجنس %K همسانه‌سازی %R 10.22103/jab.2020.2524 %X اهداف: هدف از انجام این پژوهش، تکثیر و همسانه­سازی شکل کامل و همچنین بخش ابتدایی ژن کشنده آلفا­­توکسین (α-Toxin) باکتری کلستریدیوم پرفرِینجنس با اندازه­های به ترتیب 1100 و 750 جفت باز با استفاده از ناقل بیانی pET28a در باکتری E.coli بود. مواد و روش­ها: استخراجDNA  ژنومی با استفاده از کیت کیاژن صورت گرفت. آغازگرهای جلوبرنده و برگشت در آزمایشگاه طراحی و در ناحیه ابتدایی آغازگرها ردیف­های آنزیم­های برشگر HindIII و XhoI مطابق با ناحیه کلونینگ پلاسمید مورد نظر اضافه گردید. قطعات ژنی مورد نظر با روش PCR معمولی تکثیر و در ناقل pET28a با کمک روش شوک حرارتی کلون شدند. استخراج DNA پلاسمیدی با استفاده از روش لیز قلیایی صورت گرفت. نتایج: نتایج ژل الکتروفورز محصولات PCR، تکثیر واضح و واحد شکل کامل و همچنین بخش ابتدایی قطعات ژنی مورد نظر را مطابق با اندازه های مورد انتظار نشان داد. بعلاوه با استفاده از آزمایش هضم آنزیمی منفرد و دوگانه توسط آنزیم های برشگر HindIII و XhoI همسانه سازی ژنهای آلفا­توکسین در باکتری میزبان و تولید باکتریهای نوترکیب تأیید شد. نتیجه­گیری:  با توجه به موفقیت آمیز بودن دقیق کلونینگ ژنهای آلفا­توکسین در باکتری­های بیانی میزبان، می­توان گفت که پرایمرهای طراحی شده در این تحقیق برای تکثیر ژن آلفا­توکسین بسیار اختصاصی بوده و به عنوان مارکر شناسایی و طبقه بندی این باکتری­ها می­توانند استفاده واقع شوند. همچنین با ساخت احتمالی واکسن­های نوترکیب ژنتیکی مهندسی­شده می­توان کنترل و مقابله با پاتوژن­های مهمی همچون باکتری کلستریدیوم پرفرینجنس را امکان­پذیر ساخت. %U https://jab.uk.ac.ir/article_2524_5f10468a62aa99ea88feb4f959b8be4b.pdf