%0 Journal Article %T بیان پروتئین پوششی نوترکیب ویروس X سیب زمینی در باکتری Escherichia coli %J مجله بیوتکنولوژی کشاورزی %I دانشگاه شهید باهنر کرمان (دانشکده کشاورزی و پژوهشکده فناوری تولیدات گیاهی) و انجمن بیوتکنولوژی جمهوری اسلامی ایران %Z 2228-6705 %A معصومی, حسین %A حسن شیخی, پریسا %A ذوالعلی, جعفر %A حسینی پور, اکبر %A مداحیان, محمد %D 2020 %\ 02/20/2020 %V 11 %N 4 %P 175-192 %! بیان پروتئین پوششی نوترکیب ویروس X سیب زمینی در باکتری Escherichia coli %K باکتری E. coli %K بیان پروتئین نوترکیب %K پروتئین پوششی ویروس %K ویروس X سیب زمینی %R 10.22103/jab.2020.2529 %X اهداف: ویروس X سیب زمینی (PVX) از خانواده Alphaflexiviridaeو جنس Potexvirus یکی از رایج­ترین و گسترده­ترین ویروس­های آلوده­کننده سیب زمینی در جهان می­باشد. به­دلیل گسترش و خسارت اقتصادی این ویروس در ایران، شناسایی و ردیابی آن با استفاده از روش­های با صرفه­تر ضروری می­باشد. تولید آنتی­بادی چندهمسانه­ای با استفاده از فناوری دی اِن اِی نوترکیب، یک راهکار مفید برای تسهیل شناسایی این ویروس در طبیعت می­باشد. مواد و روش­ها: بر­این اساس، در بررسی حاضر، یک نمونه سیب زمینی آلوده به PVX از مزارع سیب‌زمینی در زرند، استان کرمان جمع آوری و آلودگی آن نسبت به ویروس مذکورتوسط آزمون DAS-ELISA تایید گردید. جدایه مذکور جهت تکثیر، بر روی توتون (Nicotiana glutinosa) مایه‌زنی گردید. پس از استخراج آر اِن اِی از گیاه آزمون، با استفاده از واکنش RT-PCR و آغازگرهای اختصاصی حاوی جایگاه برش برای آنزیم­های برشی، توالی پروتئین پوششی  ویروس تکثیر و در ناقل بیان پروکاریوتی (pQE60) همسانه­سازی گردید. پلاسمید نوترکیب، به باکتری Escherichia coli سویه M15، منتقل شد. نتایج: پس از القای بیان، پروتئین مورد نظر استخراج و با تکنیک SDS-PAGE در ژل پلی آکریلامید 5/12 % مورد بررسی قرار گرفت. نتایج حاصل بیانگر آن است که وزن مولکولی باند حاصله در آزمون SDS-PAGE با وزن مولکولی پروتئین پوششی (kDa 24) مطابقت دارد. همچنین بیان پروتئین پوششی ویروس در تکنیک دات بلات نیز تأیید گردید. نتیجه گیری نهایی: در این تحقیق، یک آنتی­ژن نوترکیب مناسب جهت تشخیص ویروس X سیب زمینی تهیه گردید که به­خوبی توسط آنتی­سرم تولید شده از طریق تزریق پیکره­های کامل ویروس به خرگوش در آزمون دات بلات شناسایی شد. تولید آنتی­بادی چندهمسانه­ای با استفاده از آنتی­ژن ویروسی نوترکیب، گامی موثر در زمینه تسریع و تسهیل فرآیند شناسایی سرولوژیکی نمونه­های آلوده به این ویروس مهم خواهد بود. %U https://jab.uk.ac.ir/article_2529_4e5f48fce440326e21685bfdd3236a49.pdf