TY - JOUR ID - 2777 TI - مهندسی و تولید آنزیم نوترکیب ریبونوکلئاز پانکراس گاوی (RNase A) به عنوان یک پتانسیل دارویی JO - مجله بیوتکنولوژی کشاورزی JA - JAB LA - fa SN - 2228-6705 AU - وکیلی ازغندی, معصومه AU - نصیری, محمدرضا AU - قوتی, شاهرخ AU - جوادمنش, علی AD - گروه علوم دامی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه فردوسی مشهد، مشهد، ایران AD - دانشگاه فردوسی مشهد AD - گروه علوم دامی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه گیلان، رشت، ایران AD - گروه علوم دامی-دانشکده کشاورزی-دانشگاه فردوسی مشهد-مشهد-ایران Y1 - 2021 PY - 2021 VL - 12 IS - 4 SP - 60 EP - 76 KW - ایمنوتوکسین KW - مهندسی آنزیم KW - مهارکننده ریبونوکلئازی KW - RNase A DO - 10.22103/jab.2020.16662.1268 N2 - هدف: ایمنوتوکسین­ها یکی از امیدبخش­ترین روش­ها در حوزه­های درمانی و به ویژه درمان سرطان می­باشند که دارای ساختار منحصر به فرد توکسین-آنتی‌بادی هستند و با گذراز غشای سلولی و ورود به داخل سلول هدف باعث از بین رفتن سلول هدف می­شوند. هدف این پژوهش مهندسی و طراحی آنزیم پانکراس گاوی (RNase A) در جهت فرار از مهارکننده ریبونوکلئازی (RI) به­عنوان بخش توکسین در طراحی ایمنوتوکسین­های مورد استفاده در حوزه­های درمانی می­باشد. مواد و روش: پس از بررسی­های بیوانفورماتیک با استفاده از نرم افزار PyMol، مهندسی و تعویض آمینواسید هدف در ژن وحشی کد کننده توالی RNase A (K91A) صورت پذیرفت. پروتئین­های نوع وحشی و نوترکیب در باکتری E.coli سویه  BL21(D3) بیان، refold و با استفاده از ژل SDS-PAGE تایید گردیدند. خالص­سازی پروتئین­های تولیدی با استفاده از کروماتوگرافی تمایلی تثبیت شده با یون فلزی برای  His-tagانجام شد.  نتایج: نتایج نشان داد غلظت پروتئین­ها برای آنزیم RNase A وحشی و آنزیم نوترکیب به ترتیب 3 و 2/2 گرم بر لیتر بود. نتایج اندازه­گیری فعالیت هیدرولازی آنزیم­های تولیدی در حضور غلظت­های مختلفی از مهار‌کننده­های ریبونوکلئازی نشان داد که واریانت نوترکیب در مقایسه با آنزیم وحشی حساسیت کمتری نسبت به مهارکننده داشته و هم­چنین این واریانت افزایش فعالیت کاتالیکی را در حضور مهار کننده نسبت به آنزیم وحشی دارا می­باشد. نتایج حاصل از بررسی فعالیت آنزیمی آنزیم­ نوترکیب نسبت به آنزیم وحشی در حضور و عدم حضور ممانعت کننده ریبونوکلئازی نشان دادند که اثر متقابل بین آنزیمRNase A  و مهارکننده ریبونوکلئازی را می­توان با دست­کاری آمینو اسیدهای درگیر در این برهم­کنشمختل نمود.  نتیجه­گیری: با توجه به نتایج پژوهش حاضر می­توان این­گونه استنباط نمود که آنزیم RNase A دارای قابلیت استفاده به­عنوان یک داروی امید بخش در مهندسی و تولید ایمنوتوکسین­ها می­باشد. UR - https://jab.uk.ac.ir/article_2777.html L1 - https://jab.uk.ac.ir/article_2777_26b02b4a93eb905917fd820a4ecb6e72.pdf ER -