دانشگاه شهید باهنر کرمان (دانشکده کشاورزی و پژوهشکده فناوری تولیدات گیاهی) و انجمن بیوتکنولوژی جمهوری اسلامی ایران مجله بیوتکنولوژی کشاورزی 2228-6705 4 2 2013 02 19 Detection of Polymyxa betae in sugar beet roots using microscopical, serological and molecular methods ردیابی Polymyxa betae در ریشه چغندر قند با استفاده از روش های میکروسکوپی، سرولوژیکی و مولکولی 117 128 486 10.22103/jab.2012.486 FA فاطمه حسن زاده دانشجوی دکتری، دانشگاه آزاد اسلامی، واحد علوم و تحقیقات تهران، گروه بیماری شناسی گیاهی تهران سعید رضائی دانشجوی دکتری، دانشگاه آزاد اسلامی، واحد علوم و تحقیقات تهران، گروه بیماری شناسی گیاهی تهران سید باقر محمودی استادیار موسسه تحقیقات اصلاح و تهیه بذر چغندر قند کرج پیمان نوروزی استادیار موسسه تحقیقات اصلاح و تهیه بذر چغندر قند کرج محمدرضا صفرنژاد استادیار موسسه تحقیقات گیاهپزشکی کشور، تهران حسین صفرپور پژوهشکده بیوتکنولوژی کشاورزی ایران، بخش بیوتکنولوژی میکروبی و ایمنی زیستی، کرجدانشجوی دکتری، دانشگاه علوم پزشکی و خدمات بهداشتی درمانی شهید بهشتی، دانشکده علوم پزشکی، تهران Journal Article 2011 07 06 In order to design a precise diagnostic and quantitative system to detect of P. betae in sugar beet roots, three procedures including microscopical, serological and molecular methods were compared on a sugar beet cultivar susceptible to causal agent and vector of rhizomania disease. At first, susceptible cultivar Regina was cultivated in infested soil in greenhouse condition. After 5 weeks, roots of plants were stained with fuchsin- acid- lactophenol solution. Quantitative ELISA test was optimized with specific antiserum against recombinant protein glutathione s- transferase (GST) of P. betae. Running ELISA test, extracts of health and infected plants were prepared and used in DAS- ELISA test. Presence of P. betae in roots of plants was detected with amplification of rDNA of Plasmodiophoromycetes and P. betae species, simultaneously. Existence of cystosori of P. betae was observed in all of the plants planting in infested soil. Results of ELISA test were distinguished healthy plants from infected plants. Average of optical density at 405 nanometer for healthy plants, infected plants, protein PBS (negative control) and GST (positive control) was 0.126, 0.75, 0.11 and 2.45 respectively. Duplex PCR method was amplified two fragments of 454bp and 170bp in infected samples relating to rDNA region and specific region of the P. betae, respectively. Based on the results, it seems that, rapid detection and identification of P. betae in sugar beet and other hosts of the vector could be done on the basis of PCR method. Evaluating of resistance germplasm of sugar beet to P. betae could be recognized using quantitative ELISA tests. به منظور طراحی یک سیستم تشخیصی و سنجش دقیق P. betae در چغندرقند سه روش میکروسکوپی، سرولوژیکی و مولکولی روی یک رقم حساس به عامل و ناقل بیماری ریزومانیای چغندرقند با یکدیگر مقایسه شدند. ابتدا رقم حساس رجینا در مخلوط مساوی از خاک آلوده و کمپوست در گلخانه کشت شد. پنج هفته پس از کاشت، ریشه گیاهان در محلول اسید فوشین- لاکتوفنل رنگ آمیزی شد. آزمون الایزا با استفاده از آنتی بادی اختصاصی علیه پروتئین نوترکیب گلوتاتیون- اس- ترانسفراز P. betae بهینه سازی شد. برای این کار عصاره ریشه بوته های سالم و آلوده تهیه و در آزمون DAS- ELISA استفاده شد. حضور P. betae در ریشه گیاهان با استفاده از تکثیر هم زمان منطقه اختصاصی rDNA پلاسمودیوفورومیست ها و آغازگر اختصاصی آن ردیابی شد. وجود سیستوسورهای P. betae در ریشک های بوته هایی که در خاک آلوده بودند مشاهده شد. نتایج آزمون الایزا بوته های سالم و آلوده را از یکدیگر تفکیک نمود. میانگین جذب نوری در طول موج 405 نانومتر در بوته های سالم 126/0، بوته های آلوده 75/0، پروتئین BSA (کنترل منفی) و GST(کنترل مثبت) به ترتیب 11/ 0 و 45/2 بود. واکنش PCR دو قطعه 454 و 170 جفت باز را در نمونه های آلوده مربوط به منطقه rDNA و نشانگر اختصاصی از P. betae را تکثیر کرد. به این ترتیب به نظر می رسد برای ردیابی سریع P. betae در چغندرقند و سایر میزبان های آن می توان از روش مبتنی بر PCR و برای ارزیابی مقاومت ژرم پلاسم چغندرقند از آزمون الایزا بهره برد.

https://jab.uk.ac.ir/article_486_7d04bbbe5494ae9d2f5a76aa1c00fa2f.pdf