دانشگاه شهید باهنر کرمان (دانشکده کشاورزی و پژوهشکده فناوری تولیدات گیاهی) و انجمن بیوتکنولوژی جمهوری اسلامی ایرانمجله بیوتکنولوژی کشاورزی2228-67054120120822Optimization of Callus Induction and Cell Suspension in Catharanthus roseusبهینه سازی کالوس¬زایی و سوسپانسیون سلولی پروانش (Catharanthus roseus)11846410.22103/jab.2012.464FAجعفراحمدیدانشیار دانشگاه بین المللی امام خمینی (ره) قزوین0000-0002-2709-9392راضیهمحمدیکارشناس ارشد دانشگاه بین المللی امام خمینی (ره) قزوینقاسمعلیگروسیاستادیار دانشگاه بین المللی امام خمینی (ره) قزوینرامینحسینیاستادیار دانشگاه بین المللی امام خمینی (ره) قزوینJournal Article20120116Periwinkle (<em>Catharanthus roseus</em>) has been considered as an important medicinal plant because it contains many alkaloids such as vincristine and vinblastine. <em>In vitro</em> culture of periwinkle provides new tissue sources such as callus, cell suspension and seedlings to produce secondary metabolites. As for the mass production of callus and cell suspension in order to optimize the extraction of secondary metabolites have been few studies, the present study describes two callus production optimization procedures and one cell suspension experiment. The first trail was a factorial experiment with three explants (roots, shoots and leaves) on Murashige and Skoog (MS) medium supplemented with different concentrations of BAP and 2,4-D. The second trial was a factorial experiment with six explants (roots, shoots, <em>in-vitro</em> grown leaves, <em>ex-vitro</em> grown leaves, seeds and nodes) and ten different hormonal combinations. The cell suspension experiment was conducted with six hormonal and one control (without hormone) treatments based on completely randomized design. Comparison of means showed that the maximum callus production was obtained from leaf explants, the root and shoot explants were in the second orders. In overall, 0.5 mg /l BAP + 1 mg/l 2,4-D and 0.5 mg /l KN + 1 mg/l 2,4-D concentrations proved to be optimal for the production of maximum callus. The best combination for suspension culture was 1 mg/l 2,4-D and/or 2 mg/l 2,4-D+1 mg /l BAP according to the dried cell weightپروانش (<em>Catharanthus roseus</em>) گیاهی دارویی است که به دلیل تولید آلکالوئید های فراوان از جمله وینکریستین<em> </em>و وینبلاستین اهمیت دارد. کشت درون شیشهای پروانش منابع مستعدی از بافت یا اندامها از جمله کالوس، سوسپانسیون سلولی و گیاهچه را برای تولید متابولیتهای ثانویه فراهم میکند. از آنجا که برای تولید انبوه کالوس و بهینه سازی سوسپانسیون سلولی جهت استخراج متابولیت های ثانویه مطالعات اندکی صورت گرفته است. برای این منظور دو آزمایش جداگانه بهینه سازی کالوسزایی و یک آزمایش بهینه سازی سوسپانسیون سلولی انجام شد. آزمایش اول کالوس زایی در قالب فاکتوریل با سه ریزنمونه ریشه، ساقه و برگ و ترکیب سطوح هومونهای BAP + 2,4-D و آزمایش دوم در قالب فاکتوریل با شش ریزنمونه برگ برون شیشه، برگ درون شیشه، ساقه، ریشه، گره و بذر و ده ترکیب هورمونی اجرا شد. آزمایش بهینه سازی سوسپانسیون سلولی نیز با شش تیمار هورمونی مختلف به همراه تیمار شاهد (فاقد تنظیم کننده) در قالب طرح آماری کاملا تصادفی اجرا شد. مقایسه میانگین نشان داد که بافت برگ بیشترین کالوسزایی داشت و قطعات ریشه و ساقه در رتبههای بعدی کالزایی بودند. در این آزمایش تیمارهای یک میلی گرم در لیتر 2,4-D به تنهایی و یا به همراه 5/0 میلی گرم در لیتر BAP یا KN بیشترین کالوس را تولید کردند. در سوسپانسیون سلولی بیشترین وزن خشک سلولی در محیط کشتهای یک میلی گرم در لیتر 2,4-D و دو میلی گرم در لیتر 2,4-D به همراه یک میلی گرم در لیتر BAP اندازه گیری شد.
https://jab.uk.ac.ir/article_464_28945cd483460db3af24b640ffa9b722.pdfدانشگاه شهید باهنر کرمان (دانشکده کشاورزی و پژوهشکده فناوری تولیدات گیاهی) و انجمن بیوتکنولوژی جمهوری اسلامی ایرانمجله بیوتکنولوژی کشاورزی2228-67054120120822Cloning, nucleotide characterization and modeling expression of phytase gene phyC from Bacillus subtilisکلونینگ، بررسی خصوصیات ملکولی و پیشبینی بیان مجازی ژن فیتاز phyC از باسیلوس سابتیلیس193346510.22103/jab.2012.465FAحمیدآریان نژاد1 دانشجوی کارشناسی ارشد، گروه علوم دامی، دانشگاه فردوسی مشهدمحمد رضانصیری2دانشیار، گروه علوم دامی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه فردوسی مشهد
3دانشیار، گروه پژوهشی بیوتکنولوژی کشاورزی و دامی، پژوهشکده فناوری زیستی، دانشگاه فردوسی مشهعلی اصغراسلمی نژاداستادیار، گروه علوم دامی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه فردوسی مشهدمجتبیطهمورث پوردانشیار، گروه علوم دامی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه فردوسی مشهدرضاولی زادهاستاد، گروه علوم دامی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه فردوسی مشهداحمدآسودهاستادیار، گروه بیوشیمی، دانشکده علوم، دانشگاه فردوسی مشهدشاهرخقوتیدانشجوی دکتری، گروه علوم دامی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه فردوسی مشهدJournal Article20120326Phytase has a hydrolysis function on phytic acid which yields inorganic phosphate. Using phytase enzymes in domestic animals have a positive effect on optimal diet intake. Bacillus species can only produce thermostable alkaline phytase. Accordingly extracellular phytase gene was isolated from <em>Bacillus subtilis</em> ATCC 12711 (<em>phyc</em>) using linker primers containing restriction sites of <em>Bam</em>HI and <em>Hind</em>III. The isolated fragment was then inserted into pTZ57R/T vector for cloning and nucleotide characterization. Molecular weight of phytase protein was estimated about 42 kDa. On the other hand the model of phytase secondary structure showed the potential of thermostable characterization of enzymeفیتاز آنزیمی است که اسید فایتیک را هیدرولیز و فسفر معدنی تولید میکند. یکی از منابع بیانکننده آنزیم فیتاز، باکتریها هستند که در این میان جنس باسیلوس مهمترین باکتری تولیدکننده فیتاز قلیایی مقاوم به حرارت می باشد. ژن فیتاز خارج سلولی باکتری <em>باسیلوس سابتیلیس </em><em>phyC</em> با استفاده از آغازگرهای اختصاصی و لینکردار حاوی سایتهای برشی <em>Bam</em>HI و <em>Hind</em>III جداسازی شد. به منظور انجام توالییابی و بررسی خصوصیات، ژن تکثیر شده <em>phyC</em> به ناقل pTZ57R/T انتقال داده شد. حضور ژن هدف در ناقل کلونینگ pTZ57R/T با استفاده از روش کلونی PCR و هضم آنزیمی تایید شد. ساختارهای نوکلئوتیدی و پیش بینی ساختار پروتئینی آنزیم فیتاز با استفاده از آنالیز توالی یابی مشخص گردید. وزن مولکولی آنزیم فیتاز 42 کیلو دالتون تخمین زده شد. نتایج این مطالعه نشان داد که به خوبی می توان نسبت به کلونینگ ژن فیتاز در وکتور کلونینگ اقدام کرد. از طرف دیگر پیش بینی مجازی آنزیم فیتاز با استفاده توالی نوکلئوتیدی و اسید آمینه، پتانسیل تولید آنزیم مقاوم به حرارت را نشان داد.https://jab.uk.ac.ir/article_465_e5aa57d86a4dd8f90dbc33c8faf15c92.pdfدانشگاه شهید باهنر کرمان (دانشکده کشاورزی و پژوهشکده فناوری تولیدات گیاهی) و انجمن بیوتکنولوژی جمهوری اسلامی ایرانمجله بیوتکنولوژی کشاورزی2228-67054120120822Comparison of Reduction Activity of three Rice (Oryza sativa) Thioredoxin Isoforms in Reaction with Insulinمقایسه فعالیت احیایی سه ایزوفرم تیوردوکسین گیاه برنج (Oryza sativa) در واکنش با انسولین354846610.22103/jab.2012.466FAزهراپاپ زنکارشناس ارشد بیوتکنولوژی کشاورزی، گروه بیوتکنولوژی کشاورزی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه صنعتی اصفهانآذرشاه پیریاستادیار گروه بیوتکنولوژی کشاورزی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه صنعتی اصفهانJournal Article20111111Thioredoxins (Trxs) are ubiquitous, low-molecular-mass proteins with two cysteins in their active site WC(G/P)PC which are involved in reversible reduction of disulfide bonds. Plants contain several forms of Trxs. Thioredoxin f, m, x and y are found in the chloroplast, Trxo is localized in mitochondria and Trxh is typically cytosolic. Trxh isoforms play important roles in plants development. In this study, we describe isolation and cloning of three cDNAs encoding different Trx h isoforms, stated OsTrx1, OsTrx20 and OsTrx23. Three Trx h were heterologously expressed in Rosetta (DE3) - a strain of <em>Escherichia</em> <em>coli</em>. After inducing T7 promoter with IPTG, proper amount of recombinant proteins were produced. The recombinant proteins were purified by affinity chromatography. The recombinant Trxh isoforms were analyzed for their ability to reduce Insulin – an electron receptor substrate for Trxs- and DTT, as a primary reducing agent. All three isoforms were active, but the rate of reduction varied among different reactions. The existence of observed variations can reveal different functions for thioredoxins in plant system.
تیوردوکسینها (Trxs) پروتئینهایی با وزن مولکولی 14-12 کیلودالتون هستند که با داشتن یک گروه تیول-دی سولفید در جایگاه فعالشان (WCG/PPC)، در احیاء برگشتپذیر پیوندهای دیسولفیدی نقش دارند. ایزوفرمهای مختلفی از Trx در گیاهان وجود دارند. ایزوفرمهای f، m، x و y در کلروپلاست، ایزوفرم o در میتوکندری و ایزوفرم h در سیتوزول یافت می شوند. Trx h دارای اهمیت اساسی در رشد و نمو گیاه است. در پژوهش حاضر، توالی ژن های کد کنندهی سه ایزوفرم Trx h از گیاه برنج، با نام های OsTrx1، OsTrx20 و OsTrx23 جداسازی و همسانه سازی شدند. جهت تولید پروتئین نوترکیب، ژن ها در پلاسمید بیانی pET-15b، همسانه سازی و سپس به سویهی مناسبی از باکتری اشریشیا کلی به نام Rosetta (DE3) منتقل شدند. با تحریک پروموتر T7 به وسیلهی IPTG، میزان مناسبی از پروتئینهای نوترکیب تولید و با استفاده از روش کروماتوگرافی جذبی خالصسازی شدند. فعالیت احیایی سه ایزوفرم نوترکیب تولید شده با استفاده از انسولین به عنوان سوبسترای الکترون گیرنده و DTT به عنوان عامل احیا کننده اولیه مورد مقایسه قرار گرفت. هر سه ایزوفرم نوترکیب تولید شده فعال و قادر به احیای انسولین بودند. با این حال سرعت احیای انسولین در واکنش ها کاملا متفاوت بود که می تواند منعکس کننده تفاوت در فعالیت این ایزوفرمها در گیاه و در نتیجه احتمال تفاوت در نقش آن ها نیز باشدhttps://jab.uk.ac.ir/article_466_255519aa242bc7a493f4c5cbccebd36b.pdfدانشگاه شهید باهنر کرمان (دانشکده کشاورزی و پژوهشکده فناوری تولیدات گیاهی) و انجمن بیوتکنولوژی جمهوری اسلامی ایرانمجله بیوتکنولوژی کشاورزی2228-67054120120822Identification and cloning of chalcone synthase gene family in milk thistle (Silybum marianum L.) plantشناسایی و کلونسازی خانواده ژنی چالکون سنتاز گیاه خار مریم (Silybum marianum L.)496346710.22103/jab.2012.467FAسپیدهسنجریفارغ التحصیل کارشناسی ارشد اصلاح نباتات پردیس ابوریحان دانشگاه تهران، استان تهران، شهرستان پاکدشت.محسنابراهیمیاستادیار گروه زراعت و اصلاح نباتات پردیس ابوریحان دانشگاه تهران، استان تهران، شهرستان پاکدشتطاهرهحسنلواستادیار بخش فیزیولوژی مولکولی پژوهشکده بیوتکنولوژی کشاورزی ایران، استان البرز، کرجاحمدسادات نوریدانشیار گروه زراعت و اصلاح نباتات پردیس ابوریحان دانشگاه تهران، استان تهران، شهرستان پاکدشتزهرا ساداتشبّراستادیار بخش فیزیولوژی مولکولی پژوهشکده بیوتکنولوژی کشاورزی ایران، استان البرز، کرج.Journal Article20111219Silymarin is a flavonoid compound derived from milk thistle plant (<em>Silybum marianum</em>) seeds comprising several pharmacological applications. chalcone synthase (<em>CHS</em>) is a key enzyme in the biosynthesis of flavonoids, thereby identification of <em>CHS</em> gene in milk thistle plant can be of great importance. Seeking that, the available sequences of <em>CHS</em> genes from different plants collected, aligned and the conserved regions detected. Then, 4 degenerate primers designed based on the <em>CHS</em> consensus sequences. The fragments of <em>CHS</em> genes from Borazjan<sup>'</sup>s native genotype and Majar<sup>'</sup>s modified genotype were amplified by polymerase chain reaction and then, cloned and sequenced. Analysis of the resultant nucleotide and deduced amino acid sequences lead to identification of two different members of <em>CHS</em> gene family from <em>Silybum marianum</em>. 6 specific primers were designed based on the diverged regions of each member for amplification of related cDNA from majar<sup>'</sup>s total RNA in the RACE system. Amplified fragment of cDNA in 3'RACE and 5'RACE were cloned and sequenced. Full length cDNA was identified by overlapping the 3'RACE and 5'RACE sequences of member 1 whose open reading frame contains 1239 bp including exon 1 (190 bp) and exon 2 (1049 bp) encoding 63 and 349 amino acid residues, respectively. Altogether, analysis of the resulting nucleotide and deduced amino acid sequences lead to identification of three different members of chalcone synthase from <em>Silybum marianum</em> containing the conserved chalcone synthase C-terminal and N-terminal domainsسیلیمارین یک ترکیب فلاونوئیدی است که از دانههای گیاه خارمریم بهدست میآید و دارای خواص دارویی متعددی میباشد. چالکونسنتاز نقش کلیدی در مسیر بیوسنتزی فلاونوئیدها دارد بنابراین شناسایی ژن رمزده آن گامی مهم در مهندسی متابولوم گیاه خارمریم میباشد. بدینمنظور پس از جمعآوری دادههای توالی موجود در مورد خانواده ژنی چالکونسنتاز در سایر گیاهان، همردیفی آنها و تعیین نواحی حفظ شده، چهار آغازگر دژنره بر اساس این نواحی طراحی شد. قطعات ژنی تکثیر شده در PCR با استفاده از این جفت آغازگر از ژنوتیپ بومی منطقه برازجان و رقم اصلاح شده مجار در ناقل مناسب همسانهسازی و سپس تعیین توالی شدند. مطالعه توالی نوکلئوتیدی حاصل و توالی اسیدآمینهای آنها، منجر به شناسایی دو عضو از خانواده ژنی چالکونسنتاز در این گیاه گردید. بر اساس نقاط متنوع، شش آغازگر اختصاصی برای هریک از اعضا جهت تکثیر cDNA از روی RNAی کل رقم مجار درسیستمRACE طراحی شد. قطعات cDNAی تکثیر شده در3'RACE و5'RACE در ناقل مناسب همسانه سازی و سپس تعیین توالی شدند. توالی کامل cDNAی ژن چالکون سنتاز از همپوشانی توالیهای5'RACE و 3'RACE عضو یک شناسایی گردید که قالب باز خواندنی آن دارای 1239 باز بوده و شامل اگزون یک (190 باز) و اگزون دو (1049 باز) میباشد که به ترتیب 63 و 349 اسیدآمینه را رمز میکنند. مطالعه کل توالیهای نوکلئوتیدی و اسیدآمینهای بهدست آمده، منجربه شناسایی سه عضو از خانواده ژنی چالکونسنتاز در این گیاه برای اولین بار شد که دارای دومینهای حفظ شده انتهای آمین و کربوکسیل چالکون سنتاز میباشندhttps://jab.uk.ac.ir/article_467_427310bea52cfe18e2b85f64597856fd.pdfدانشگاه شهید باهنر کرمان (دانشکده کشاورزی و پژوهشکده فناوری تولیدات گیاهی) و انجمن بیوتکنولوژی جمهوری اسلامی ایرانمجله بیوتکنولوژی کشاورزی2228-67054120120822Partial biological and molecular characterization of Iranian isolates of Tomato aspermy virusتعیین برخی از مشخصات بیولوژیکی و مولکولی جدایه¬های ایرانی ویروس بی ¬بذری گوجه فرنگی658146810.22103/jab.2012.468FAمحمدمداحیاندانشجوی سابق کارشناسی ارشد، بخش گیاهپزشکی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه شهید باهنر کرمانحسینمعصومیدانشیار بخش گیاهپزشکی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه شهید باهنر کرمانJournal Article20120105<em>Tomato aspermy virus</em> (TAV) has a wide host range and usually infects ornamental plants. To identify and characterize molecular and biological properties of the virus, 436 samples were collected from various provinces of Iran. TAV was detected in three samples of ornamental plants through double antibody sandwich ELISA test using specific polyclonal antibody. The 687 bp segment including the coat protein (CP) gene was amplified by RT-PCR, cloned and sequenced. Nucleotide sequences of the CP gene of Iranian TAV isolates were compared with available GenBank isolates. Phylogenetic analysis showed that TAV isolates were classified into two groups I and II, and the group II was divided in two subgroups IIA and IIB. All the Iranian TAV isolates were classified in subgroup IIA and shared the high nucleotide and amino acid sequence identities (more than 99%). The results of this study also showed a wide host range of the Iranian TAV isolates among test plants. This study is the first report of TAV occurrence in Iran and the first natural occurrence of TAV on <em>Petunia hybrida</em> in the world. ویروس بیبذری گوجهفرنگی (<em>Tomato aspermy virus,</em> TAV) دارای دامنه میزبانی وسیعی میباشد و اغلب در گیاهان زینتی ایجاد آلودگی مینماید. به منظور شناسایی و بررسی خصو صیات ملکولی و بیولوژیکی این ویروس، تعداد 436 نمونه گیاهی ار استانهای مختلف ایران جمع آوری گردید. از بین نمونههای مورد بررسی آلودگی به TAV در سه نمونه از گیاهان زینتی با استفاده از آزمون الایزا به روش ساندویچ دو طرفه مورد تایید قرار گرفت. قطعه 687 جفت بازی مربوط به ژن پروتئین پوششی با استفاده از آزمون RT-PCR و یک جفت آغازگر اختصاصی، تکثیر، سپس همسانه سازی و تعیین ترادف گردیدند. ترادف جدایههای ایرانی با دیگر جدایههای TAV<span style="text-decoration: underline;">،</span> ، موجود در بانک ژن مورد مقایسه قرار گرفت. نتایج حاصل از تجزیه فیلوژنتیکی بیانگر آن است که جدایههای مورد بررسی در دو گروه اصلی I و II قرار میگیرند، که گروه II نیز به دو زیر گروه IIA و IIB تقسیم میگردد. هر سه جدایه ایرانی در زیر گروه IIA واقع میگردند. همچنین جدایههای ایرانی دارای مشابهت بالای ترادف نوکلئوتیدی و اسیدهایآمینه مربوط به ژن پروتئین پوششی به میزان بیش از %99 با یکدیگر میباشند. نتایج حاصل از تعیین دامنه میزبانی سه جدایه ایرانی TAV نشاندهنده آن است که جدایههای ایرانی از دامنه میزبانی گستردهای بر روی گیاهان آزمون برخوردار میباشند. این بررسی اولین گزارش از وقوع ویروس بیبذری گوجهفرنگی در ایران و معرفی گیاه اطلسی به عنوان میزبان جدید این ویروس در دنیا میباشدhttps://jab.uk.ac.ir/article_468_1583d6c0780a7f7705dba14d30855150.pdfدانشگاه شهید باهنر کرمان (دانشکده کشاورزی و پژوهشکده فناوری تولیدات گیاهی) و انجمن بیوتکنولوژی جمهوری اسلامی ایرانمجله بیوتکنولوژی کشاورزی2228-67054120120822Identification and strain determination of M. paratuberculosis (MAP) by PCR and REA methods based on IS900 and IS1311 insertion segmentsشناسایی و تعیین سویه مایکوباکتریوم پاراتوبرکلوزیس (MAP) به روش PCR و REA بر اساس قطعات درون جایگیر IS900 و IS1311839646910.22103/jab.2012.469FAمحمدرضانصیری2دانشیار، گروه پژوهشی بیوتکنولوژی کشاورزی و دامی، پژوهشکده فناوری زیستی، دانشگاه فردوسی مشهد1دانشیار، گروه علوم دامی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه فردوسی مشهدمحمدحسنجهاندار3دانشجوی مقطع دکتری، گروه علوم دامی، دانشگاه فردوسی مشهدمهدیسلطانیدانشجوی مقطع دکتری، گروه علوم دامی، دانشگاه فردوسی مشهدمرتضیمهدویجوی مقطع دکتری، گروه علوم دامی، دانشگاه فردوسی مشهدمحمددوستیدانشجوی مقطع دکتری، گروه علوم دامی، دانشگاه فردوسی مشهدJournal Article20120324The purpose of this study was to identifying the <em>M. avium paratuberculosis </em>(MAP), investigating its outbreaks and optimizing a fast, accurate and simple method based on PCR and RFLP for detection of this subspecies and their strains. This pathogen cause a chronic infection called Johne's disease. Johne's disease a ruminant chronic infection and economically, is one of the most important disease in livestock industry. 243 fecal samples and 56 raw milk samples of suspected cattle, from some farms of Mashhad were gathered. After DNA extraction, in order to identifying contaminated samples, a specific MAP insertion segment called IS900, with length of 413bp was amplified with PCR using P90 and P91 primers. Then, in order to determining the cow and sheep strains of MAP, 268bp fragment of insertion segment IS1311 was amplified with PCR using M56 and M94 primers. The resulting fragments were digested with <em>Hinf</em>I restriction enzyme. 107 of 243 stool samples (44%) and 10 of 56 raw milk samples (18%) were identified as infected with MAP. Among 56 Milk and feces samples taken from the same animal, 19 stools and 10 milk samples were identified as infected (18% vs. 34%). Results of enzymatic digestion also showed that all detected MAP were from bovine isolates.هدف از این مطالعه شناسایی مایکوباکتریوم آویوم زیرگونه پاراتوبرکلوزیس (<em>M. avium paratuberculosis</em>)، بررسی درصد شیوع آلودگی به آن و همچنین بهینه سازی یک روش سریع، دقیق و ساده به کمک PCR برای تشخیص این زیرگونه و جدایه های آن بود. مایکوباکتریوم آویوم زیرگونه پاراتوبرکلوزیس (MAP)، از لحاظ اقتصادی عامل یکی از مهمترین بیماری ها در صنعت دامپروری به نام بیماری یون (Johne's Disease) می باشد، که یکی از عفونت های مزمن نشخوارکنندگان به شمار می رود. به منظور شناسایی این زیرگونه 243 نمونه مدفوع و 56 نمونه شیر خام از دام های مشکوک گاوداری های اطراف مشهد جمع آوری شد. پس از استخراج DNA به منظور شناسایی نمونه های آلوده، قطعه درون جایگیر اختصاصی MAP به نام IS900 به طول 413 جفت باز، با استفاده از پرایمرهای P90 و P91 تکثیر شد. سپس به منظور تعیین جدایه گاوی و گوسفندی MAP، نسبت به تکثیر قطعه درون جایگیر IS1311 با طول 268 جفت باز به کمک دو پرایمر M56 و M94 اقدام شد. قطعات حاصله به کمک آنزیم <em>Hinf</em>I هضم شدند. تعداد 107 نمونه از 243 نمونه مدفوع (44%) و 10 نمونه از 56 نمونه شیر خام (18%) مورد مطالعه، آلوده به MAP بودند. از بین 56 نمونه شیر و مدفوع که از دام های یکسانی گرفته شده بودند 19 نمونه مدفوع و 10 نمونه شیر، آلوده شناسایی شدند (18% در مقابل 34%). نتایج هضم آنزیمی نیز نشان داد که تمامی MAP های شناسایی شده از جدایه گاوی می باشند.
https://jab.uk.ac.ir/article_469_6269fc5fe77f998d4eb2898370cd99d0.pdfدانشگاه شهید باهنر کرمان (دانشکده کشاورزی و پژوهشکده فناوری تولیدات گیاهی) و انجمن بیوتکنولوژی جمهوری اسلامی ایرانمجله بیوتکنولوژی کشاورزی2228-67054120120822Influence of inbreeding and crossbreeding on the in vitro embryo development during normal and heat stress conditionاثرات همخونی و آمیخته گری بر تکوین رویان آزمایشگاهی در شرایط معمول و استرس حرارتی97107118510.22103/jab.2012.1185FAمهدیوفای والهدانشیار گروه علوم دامی، دانشکده کشاورزی دانشگاه زابل0000-0002-8981-7847مجتبیطهمورث پورمشهد - دانشگاه فردوسی مشهد - گروه علوم داممرتضیدلیری جوپاریپژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیستفناوری0000-0001-9465-7983محمدرضانصیریمشهد مشهد دانشگاه فردوسی مشهد دانشکده کشاورزی بخش علوم دامی0000-0001-7119-8155آیدینرحیم طایفهپژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری0000-0001-8583-2321Journal Article20120213Inbreeding and Heat stress have negative effects on reproductive performance of dairy cattle. Two suggested strategies to overcome to these factors are to use crossbreeding and crossbreeding with thermo tolerant genotype, respectively. The aims of present study were to determine the effects of inbreeding and crossbreeding on cleavage and blastocyst rates at early stages of in vitro development in inbreed (Holstein) and crossbreds (Sistani-Holstein) embryos during normal and heat shock stress. In vitro-matured (IVM) Holstein oocytes (n=623) were inseminated with either Holstein or Sistani spermatozoa, and after incubation period, presumptive embryos were collected and assigned to control (38.5°C) or heat shock at 96 h post insemination (hpi; 41°C for 12 h) treatments. The presumptive embryos were cultured in vitro for 8 days and evaluated for cleavage and blastocyst formation rates per cleaved embryo. Data were analyzed using logistic regression. The results indicated a cleavage at 48 hpi was influenced by the species of the sperm (embryo) genotypes, where percentage of Holstein oocytes cleaving after insemination with Holstein spermatozoa were significantly higher than Holstein oocytes inseminated with Sistani spermatozoa (207/314; 66% vs. 130/309; 42%), (P≤0.05); respectively. moreover, the overall blastocyst production rate during heat shock stress was clearly affected by the crossbreeding, with Holstein oocytes were inseminated with Sistani spermatozoa having a greater blastocyst yield in comparison with Holstein inbreed embryos during heat shock stress (4/49; 8.1% vs. 1/84; 1.1%), (P≤0.05) respectively. In conclusion, the present results indicate that Sistani-Holstein crossbreed embryos are more resistant to heat shock than purebred Holstein at early stages of in vitro development. Moreover, according to this criterion, crossbreeding with Sistani spermatozoa may result in higher pregnancy rates in Holstein cows during heat stress condition.
همخونی و استرس حرارتی روی بازدهی صفات تولید مثلی در گاو شیری اثر منفی دارند. دو راهکار پیشنهادی برای غلبه بر این عوامل به ترتیب: آمیخته گری و آمیخته گری با نژادهای مقاوم به گرما است. هدف از این مطالعه ارزیابی تاثیر همخونی و آمیخته گری بر روی نرخ تسهیم و قابلیت تکوین رویان های آزمایشگاهی همخون (هلشتاین) و آمیخته (سیستانی- هلشتاین) در شرایط معمول و استرس حرارتی بود. پس از انجام بلوغ، تخمک های بالغ گاو هلشتاین (تعداد=623) با هر یک از دو اسپرم هلشتاین و سیستانی تلقیح و پس از طی دوره انکوباسیون، زیگوتهای احتمالی جمع آوری و به محیط های کشت با شرایط معمول (°C5/38) و یا استرس حرارتی در زمان 96 ساعت پس از تلقیح (°C41 برای مدت 12 ساعت) منتقل شدند. زیگوتهای احتمالی برای مدت 8 روز کشت و برای نرخ تسهیم و تولید بلاستوسیست به ازای رویان های تسهیم شده ارزیابی شدند. اطلاعات به دست آمده با استفاده از رویه رگرسیون لجستیک تجزیه و تحلیل شدند. نتایج نشان داد نرخ تسهیم در زمان 48 ساعت پس از لقاح تحت تاثیر ژنوتیپ اسپرم (رویان) است، بطوری که تخمک های هلشتاین تلقیح شده با اسپرم هلشتاین در مقایسه با تخمک های هلشتاین بارور شده با اسپرم سیستانی نرخ تسهیم بالاتری داشتند (314/207; 66 درصد در مقابل 309/130; 42 درصد)، (05/0≤ P). علاوه بر این نرخ تولید بلاستوسیست در شرایط استرس حرارتی تحت تاثیر آمیخته گری قرارگرفت، بطوری که تخمکهای هلشتاین تلقیح شده با اسپرم سیستانی قابلیت تکوین بالاتری در مقایسه با رویانهای همخون هلشتاین در شرایط استرس حرارتی داشتند (49/4; 1.8 درصد در مقابل 84/1; 1.1 درصد)، (05/0≤ P). در مجموع نتایج این مطالعه نشان داد که رویان های آمیخته سیستانی- هلشتاین، قابلیت تکوین بالاتری در شرایط استرس حرارتی در مقایسه با رویانهای خالص و همخون هلشتاین در مراحل اولیه تکوین دارند. براساس نتایج حاصله ممکن است که آمیخته گری با اسپرم سیستانی در بهبود بازدهی نرخ آبستنی گاوهای هلشتاین در شرایط استرس حرارتی مؤثر باشد.https://jab.uk.ac.ir/article_1185_55bf766691977b459daaaa8f7f5ccbab.pdf