شناسایی و تعیین ویژگی‌های مولکولی فیتوپلاسمای همراه زردی و ریز برگی هلو در استان‌های خراسان رضوی و شمالی

نویسندگان

1 گروه گیاهپزشکی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه فردوسی مشهد

2 دانشجوی دکتری بیماری شناسی گیاهی، گروه گیاهپزشکی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه فردوسی مشهد، مشهد، ایران.

چکیده

در بازدیدهای تابستان 1396 از باغات درختان میوه در استان­های خراسان رضوی و شمالی، علائم زردی و ریز برگی در درختان هلو در سطح باغات دیده شد. نمونه­های دارای علائم فوق از باغات جمع­آوری و برای شناسایی عامل بیماری به آزمایشگاه منتقل شدند. عامل بیماری به وسیله پیوند به نهال­های سالم هلو انتقال یافت و در گیاه مایه­زنی شده با پیوند، علائم زردی و ریز برگی مشاهده شد. ردیابی عامل بیماری توسط آزمون­های دو مرحله­ای PCR با جفت آغازگرهای P1/P7 (دور اول) و R16F2n/R16R2 (دور دوم) صورت گرفت.        قطعه­های حدود 1250 جفت بازی حاصل از PCR دو مرحله­ای توالی­یابی شدند. مقایسه توالی­های به دست آمده با توالی­های­ موجود در NCBI توسط نرم افزار BLAST و بررسی چندشکلی طولی قطعات برشی مجازی ناحیه تکثیر شده، نشان داد که فیتوپلاسمای همراه با زردی هلو در استان­های خراسان رضوی و شمالی شباهت بالایی با Candidatus Phytoplasma phoenicium مربوط به گروه جاروک نخود کبوتر (Pigeon pea witches broom) یا 16SrIX آر ان ای ریبوزومی دارند. این اولین گزارش از بیماری زردی و ریز برگی هلو و تعیین ویژگی­های فیتوپلاسمای همراه با آن در این مناطق می­باشد.

کلیدواژه‌ها


عنوان مقاله [English]

Identification and molecular characterization of the phytoplasma associated with leaf stunting and yellowing disease in Razavi and North Khorasan provinces

نویسندگان [English]

  • Saeed Tarighi 1
  • Mojtaba Dehghan 2
  • Ebadollah Ebadi 2
1 Dept. Plant Protection, Faculty of Agriculture, Ferdowsi University of Mashhad
2 Ph.D. Student of plant pathology, Department of Plant Protection, Faculty of Agriculture, Ferdowsi University of Mashhad, Mashhad, Iran.
چکیده [English]

In 2017, leaf stunting and yellowing were observed on twigs and branches of stone fruit trees in production regions in Razavi and North Khorasan provinces of Iran. For diagnosis of disease and identification of the causal agent, symptomatic leaf samples were collected in these orchards and were carried to the laboratory. The disease agent was successfully transmitted by grafting from naturally symptomatic samples to peach (Prunus persica) seedlings. Total DNA was extracted from plant samples and indexed by nested PCR using phytoplasma generic primers, P1/P7 and R16F2n/R2. PCR products were sequenced and the nucleotide sequences were compared with those of other phytoplasmas in GenBank and analyzed by virtual restriction fragment length polymorphism (RFLP). The phytoplasmas associated with leaf stunting and yellowing disease in Razavi and North Khorasan provinces were identified as members of the 16SrIX group or Pigeon pea witches broom (Candidatus Phytoplasma phoenicium). This is the first report of leaf stunting and yellowing disease and characterization of associated phytoplasma in these regions.

کلیدواژه‌ها [English]

  • Phytoplasma
  • molecular analysis
  • 16SrIX group

گزارش کوتاه علمی

 

شناسایی و تعیین ویژگی­های مولکولی فیتوپلاسمای همراه زردی و ریز برگی هلو در استان­های خراسان رضوی و شمالی

سعید طریقی*1، مجتبی دهقان نیری2، عبادالله عبادی 3

1دانشیار، گروه گیاهپزشکی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه فردوسی مشهد، مشهد، ایران.

2 دانشجوی دکتری بیماری شناسی گیاهی، گروه گیاهپزشکی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه فردوسی مشهد، مشهد، ایران.

3دانشجوی دکتری بیماری شناسی گیاهی، گروه گیاهپزشکی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه فردوسی مشهد، مشهد، ایران.

تاریخ دریافت: 12/04/1397، تاریخ پذیرش: 26/08/1397

 

چکیده

در بازدیدهای تابستان 1396 از باغات درختان میوه در استان­های خراسان رضوی و شمالی، علائم زردی و ریز برگی در درختان هلو در سطح باغات دیده شد. نمونه­های دارای علائم فوق از باغات جمع­آوری و برای شناسایی عامل بیماری به آزمایشگاه منتقل شدند. عامل بیماری به وسیله پیوند به نهال­های سالم هلو انتقال یافت و در گیاه مایه­زنی شده با پیوند، علائم زردی و ریز برگی مشاهده شد. ردیابی عامل بیماری توسط آزمون­های دو مرحله­ای PCR با جفت آغازگرهای P1/P7 (دور اول) و R16F2n/R16R2 (دور دوم) صورت گرفت.        قطعه­های حدود 1250 جفت بازی حاصل از PCR دو مرحله­ای توالی­یابی شدند. مقایسه توالی­های به دست آمده با توالی­های­ موجود در NCBI توسط نرم افزار BLAST و بررسی چندشکلی طولی قطعات برشی مجازی ناحیه تکثیر شده، نشان داد که فیتوپلاسمای همراه با زردی هلو در استان­های خراسان رضوی و شمالی شباهت بالایی با Candidatus Phytoplasma phoenicium مربوط به گروه جاروک نخود کبوتر (Pigeon pea witches broom) یا 16SrIX آر ان ای ریبوزومی دارند. این اولین گزارش از بیماری زردی و ریز برگی هلو و تعیین ویژگی­های فیتوپلاسمای همراه با آن در این مناطق می­باشد.

کلمات کلیدی: فیتوپلاسما، آنالیز مولکولی، گروه 16SrIX.

 

مقدمه

 

فیتوپلاسماها بیمارگر باکتریایی گیاهان هستند که سبب کاهش عملکرد اقتصادی در چندین محصول یکساله و چندساله از جمله درختان چوبی و میوه می­شوند (Bertaccini & Duduk, 2009). فیتوپلاسماها محدود به آوندهای آبکش گیاهان هستند که از ابتدای کشف آن در سال 1967، بیماری­های مختلفی در دنیا با این موجودات گزارش شده است (Lee et al., 2000). فیتوپلاسماها در طبیعت توسط زنجرک­های برگی، زنجرک­های بوته­ای و پسیل­ بین گیاهان منتقل می­شوند (Weintraub & Beanland, 2006).

هلو (Prunus persica) یکی از محصولات مهم در جهان و ایران می­باشد. درختان میوه هسته­دار نظیر هلو به چندین بیماری مرتبط با فیتوپلاسماها حساس هستند. در جنوب لبنان، گیاهان هلو و شلیلی که به طور قابل توجه به فیتوپلاسما با علائم ازدیاد جوانه آلوده بودند با استفاده از PCR دو مرحله­ای با جفت آغازگرهای P1/P7 و R16F2n/R16R2 مورد ارزیابی قرار گرفتند و Ca. Phytoplasma phoenicium در ارتباط با بیماری فیتوپلاسمایی هلو و شلیل در این مناطق گزارش گردید (Abou-Jawdah et al., 2009). این فیتوپلاسما که متعلق به گروه جاروک نخود کبوتر (16SrIX) می­باشد سبب خسارت به شمار زیادی از درختان بادام در ایران و لبنان شده است (Abou-Jawdah et al., 2002; Salehi et al., 2006). تنوع ژنتیکی استرین­های Ca. Phytoplasma phoenicium همراه با درختان هلو و شلیل در لبنان با تفاوت در طول قطعات برشی (RFLP) محصول PCR بررسی و حضور دو گروه جدید F و G را از گروه 16SrIX اعلام کردند (Molino Lova et al., 2011). در آنالیز مولکولی نمونه­های به دست آمده از باغات هلو در مناطق مرکزی و شمال غرب ایران با استفاده از توالی­یابی بخشی از ناحیه 16S rRNA و ناحیه فاصله انداز بین ژنی 16S-23S rDNA مشاهده شده که Ca. Phytoplasma aurantifolia،Ca. Phytoplasma solani و  Ca. Phytoplasma trifolii در این مناطق شایع هستند (Zirak et al., 2010). در بررسی نمونه­های جمع آوری شده از درختان هلوی دارای علائم زردی و ریز برگی در استان کردستان، آنالیزهای مولکولی توالی­ به دست آمده توسط PCR دو مرحله­ای با جفت آغازگرهای P1/P7 و R16F2n/R16R2، نزدیکی این توالی­ را با Ca. Phytoplasma phoenicium نشان داد (Ghayeb zamharir, 2014). در تحقیق حاضر در مناطقی از باغات استان­های خراسان رضوی و شمالی علائم زردی و ریز برگی هلو مشاهده گردید. در این راستا بررسی­های مولکولی با استفاده از PCR دو مرحله­ای با جفت آغازگرهای P1/P7 و R16F2n/R16R2 و بررسی چند شکلی طولی قطعات برشی مجازی (Virtual-RFLP) جهت شناسایی فیتوپلاسمای همراه با زردی و ریز برگی هلو در این مناطق انجام شد.

نمونه­های دارای علائم زردی و ریز برگی، از درختان هلو باغات استان­های خراسان رضوی و شمالی جمع­ آوری گردید. نمونه­ها جهت استفاده در تهیه پیوندک آلوده در آزمایش­های انتقال عامل بیماری و استخراج DNA کل جهت آزمون­های مولکولی به آزمایشگاه منتقل شدند.

برای انتقال عامل بیماری با استفاده از روش پیوند جانبی، از سرشاخه­های ظریف نمونه­های بیماری جمع آوری شده به عنوان پیوندک و از نهال­های سالم هلو به عنوان پایه استفاده شد و پس از انجام پیوند، نهال­ها در شرایط گلخانه با دوره نوری 15 ساعت روشنایی و 9 ساعت تاریکی با دمای °C 2±26 به مدت 5 ماه نگهداری شدند.

جهت بررسی­های مولکولی، استخراج DNA از نمونه­ها به روش Zhang et al. (1998) انجام شد. از آزمون PCR جهت بررسی نمونه­های DNA  از نظر وجود فیتوپلاسما، استفاده شد. در آزمون PCR  دو مرحله­ای از جفت آغازگرهای P1/P7 (Schneider et al., 1995) در مرحله اول و R16F2n/R16R2 (Gundersen & Lee, 1996) در مرحله دوم استفاده گردید. حجم نهایی مخلوط واکنش PCR، 25 میکرولیتر بود که شامل یک میکرولیتر از هر آغازگر با غلظت پایه 10 پیکومولار، دو میکرولیتر DNA الگو با غلظت تقریبی50 نانوگرم و 5/12 میکرولیتر مستر میکس PCR آمپلیکون[1] که با افزودن آب مقطر استریل به حجم 25 میکرولیتر رسانده شد. محصولات PCR به دست آمده در ژل آگارز 2/1 درصد به همراه نشانگر DNA بارگذاری و به مدت یک ساعت با ولتاژ ثابت 100 ولت الکتروفورز شدند. رنگ آمیزی ژل آگارز با رنگ DNA green viewer انجام و عکسبرداری از ژل با استفاده از دستگاه ژل داکیومنت[2] انجام شد.

توالی یابی قطعه­های به دست آمده توسط شرکت بایونیر[3] کره جنوبی انجام شد. سپس توالی­ها با استفاده از نرم افزار BioEdit ver. 7.0.9.0 اصلاح گردید. توالی­های به دست آمده با استفاده از نرم افزار BLAST[4] موجود در NCBI با توالی موجود در ژن بانک مقایسه گردید. همچنین درخت فیلوژنی با استفاده از توالی­های به دست آمده و توالی­های موجود در ژن بانک توسط نرم افزار MEGA 5.05 ترسیم گردید.

چند شکلی طولی قطعات برشی مجازی (Virtual-RFLP) با استفاده از برنامه iphyclassifier (Zhao et al., 2009) انجام شد که ناحیه تکثیر شده با جفت آغازگر R16F2n/R16R2، در جدایه­های زردی هلو و فیتوپلاسماهای مربوط به گروه 16SrIX با 17 آنزیم شامل AluI، BamHI، BfaI، BstUI، DraI، EcoRI، HaeIII، HhaI، HinfI، HpaI، HpaII، KpnI، Sau3AI، MseI، RsaI، SspI و TaqI بطور شماتیک برش داده شده و جایگاه فیتوپلاسمای مورد بررسی در گروه مورد نظر تعیین گردید.

در این بررسی نمونه­هایی با علائم مشکوک به بیماری فیتوپلاسمایی در باغات آلوده استان­های خراسان رضوی و شمالی مشاهده گردید. علائم بیماری شامل زردی و ریز برگی همراه با پر رشدی شاخه­ها بود (شکل 1). درختان آلوده ضعیف­تر از سایر درختان بوده و در نتیجه با محصول کمتر و یا عدم تولید محصول همراه        می­باشند. همچنین در انتقال با پیوند نمونه­های دارای علائم زردی به نهال­های سالم هلو، بعد از پنج ماه نشانه­های زردی و ریز برگی مشاهده گردید.

پس از انجام آزمون PCR مستقیم با جفت آغازگر P1/P7 و PCR مرحله دوم با جفت آغازگر R16F2n/R16R2 از نمونه­های دارای علائم، قطعاتی به ترتیب حدود 1800 و 1250 جفت باز مشاهده شد. در همین راستا هیچ باندی از نمونه­های تهیه شده از درختان سالم و بدون علائم (کنترل منفی) مشاهده نگردید. محصولات PCR حاصل از جفت آغازگر R16F2n/R16R2 تعیین توالی گردید و با استفاده از نرم افزار BLAST موجود در NCBI با سایر توالی­های موجود در ژن بانک مقایسه شد. نتایج نشان داد که توالی­های مورد بررسی (GenBank accession no. MH084725, MH084726) بیشترین شباهت را با فیتوپلاسماهای گروه 16SrIX (جاروک نخود کبوتر) دارند. توالی­های به دست آمده در ژن بانک بر اساس درخت فیلوژنی ترسیم شده با توالی­های مربوط به گروه­های مختلف و همچنین توالی­های مربوط به گروه 16SrIX، توالی­های مورد بررسی در کنار Candidatus Phytoplasma phoenicium طبقه بندی شدند (شکل 2). همچنین آنالیز RFLP مجازی توالی تکثیر شده حاصل از جفت آغازگر R16F2n/R16R2 نشان داد که فیتوپلاسمای همراه با زردی هلو در مناطق مورد بررسی بیشترین شباهت را با Ca. Phytoplasma phoenicium مربوط به زیرگروه B در گروه 16SrIX (ضریب تشابه 97/0) دارد.

 


 

 

 

شکل 1- علائم بیماری زردی و ریز برگی درختان هلو در باغات استان­های خراسان رضوی و شمالی: A و B، علائم زردی و  ریز برگی در باغات مشهد، C و D، علائم زردی و ریز برگی در در باغات بجنورد.

Figure 1- Symptoms of leaf stunting and yellowing in peach trees in Razavi and North Khorasan provinces: A, B: leaf stunting and yellowing symptoms in Mashhad orchards, C, D: leaf stunting and yellowing symptoms in Bojnord orchards.

 

شکل 2- درخت فیلوژنی رسم شده بر اساس توالی­های نواحی 16S rRNA فیتوپلاسماهای جدا شده از زردی هلو در استان­های خراسان رضوی (M) و شمالی (B) و توالی­های موجود در ژن بانک NCBI با روش Neighbor joining و با برنامه MEGA5. اعداد ثبت شده در محل انشعاب­ها نشانگر درصد تایید خوشه بندی با 1000 تکرار نمونه برداری (bootstrap) است. خط نشانه تغییر تعداد نوکلئوتید در هر محل است.

Figure 2- phylogenetic tree based on the 16S rRNA gene nucleotide sequences of phytoplasmas. The tree was constructed by the neighbor-joining method using MEGA5 Software. The numerals represent the confidence level (bootstrap) from 1000 resampling. The bar indicates number of nucleotide changes per site.

 

 

مشاهده علائم در باغ­های مورد بررسی و همچنین انجام آزمون­های آزمایشگاهی اثبات کننده حضور بیمارگر فیتوپلاسمایی روی درختان هلو می­باشد که می­تواند تهدید جدی برای درختان هلو و سایر درختان میوه هسته­دار در این مناطق و حتی استان­های مجاور باشد. در همین راستا شناسایی ناقل و یافتن راهکارهای مناسب برای مقابله با این بیماری از اهمیت بالایی برخوردار است. مقایسه توالی­های به دست آمده با توالی­های موجود در ژن بانک، نشان دهنده شباهت بالای توالی­ها با Ca. Phytoplasma phoenicium می­باشد. این فیتوپلاسما ابتدا در ارتباط با جاروک بادام در لبنان و ایران معرفی گردید (Verdin et al., 2003) که به عنوان یک بیماری گسترده و مخرب از این مناطق گزارش شده بود (Abou-Jawdah et al., 2002; Salehi et al., 2006; Ghayeb Zamharir, 2011). در سال­های اخیر نیز این فیتوپلاسما به عنوان همراه بیماری فیتوپلاسمایی زردی هلو از ایران و لبنان گزارش گردید (Abou-Jawdah et al., 2009; Ghayeb Zamharir, 2014). چندین استرین مختلف Ca. Phytoplasma phoenicium شناسایی شده­اند که این استرین­ها در زیرگروه­های B، D، F و G از گروه 16SrIX قرار گرفته­اند (Molino Lova et al., 2011). زیر گروه B در حال حاضر همچنین برای زیر گروه D نیز تعیین شده است (Quaglino et al., 2015). در مناطق مورد بررسی امکان وجود سایر فیتوپلاسماهای مربوط به گروه­های دیگر، در درختان هلو نیز وجود دارد که نیازمند مطالعات گسترده­تر جهت دستیابی به این مهم می­باشد. با توجه به گسترش بیماری در مناطق مختلف ایران پیش بینی می­شود این فیتوپلاسما یک ناقل حشره­ای موثر داشته باشد. در نتیجه پژوهش­های بیشتر جهت یافتن راهکارهای مناسب برای کنترل این بیماری الزامی به نظر می­رسد. در این راستا می­بایست در مناطق مختلف از نهال­های تایید شده جهت کاشت استفاده کرد و اقدامات لازم جهت محدود کردن گسترش بیماری به مناطق مختلف را در دستور کار قرار داد. همچنین بررسی سایر درختان میوه هسته­دار از نظر وجود فیتوپلاسما نیز از پژوهش­های مهم ­­پیش­رو در این مناطق می­باشد تا با تخمین پراکنش فیتوپلاسماها بر روی این میزبان­ها اقدامات لازم جهت کاهش خسارت برنامه­ریزی و انجام شود.


 

منابع

Abou-Jawdah Y, Karakashian A, Sobh H, Martini M, Lee IM (2002). An epidemic of almond witches’-broom in Lebanon: classification and phylogenetic relationship of the associated phytoplasma. Plant Disease 86: 477–484.

 

Abou-Jawdah Y, Sobh H, Akkary M (2009). First Report of Almond Witches Broom Phytoplasma (‘Candidatus Phytoplasma Phoenicium’) Causing a Severe Disease on Nectarine and Peach Trees in Lebanon. EPPO Bulletin 39: 94-98.

Ghayeb Zamharir M (2011). Phytoplasmas Associated with Almond Witches’ Broom Disease: An Overview. African Journal of Microbiology Research 5: 6013-6017.

Ghayeb Zamharir M (2014). Molecular Study of a New Disease of Peach in Iran Associated with a Phytoplasma. Advances in Microbiology 2014: 20-24.

Gundersen DE, Lee IM (1996). Ultrasensitive detection of phytoplasmas by nested-PCR assays using two universal primer pairs. Phytopathologia Mediterranea 35:144-151.

Lee IM, Davis RE, Gundersen Rindal DE (2000). Phytoplasmas: phytopathogenic molli-cutes. Annual Review of Microbiology 56: 1593–1597.

Molino Lova M, Quaglino F, Abou-Jawdah Y, Choueiri E, Sobh H, Alma A, Tedeschi R, Casati P, Bianco PA (2011). Identification of new 16SrIX subgroups, -F and -G, among 'Candidatus Phytoplasma phoenicium' strains infecting almond, peach and nectarine in Lebanon. Phytopathologia Mediterranea 50: 273-282.

Quaglino F, Kube M, Jawhari M, Abou-Jawdah Y, Siewert C, Choueiri E, Sobh H, Casati P, Tedeschi R, Lova MM, Alma A, Bianco PA (2015). ‘Candidatus Phytoplasma phoenicium ’associated with almond witches’-broom disease: from draft genome to genetic diversity among strain populations. BMC microbiology 148: 1-15.

Salehi M, Izadpanah K,  Heydarnejad J (2006). Characterization of a new almond witches’ broom phytoplasma in Iran. Journal of Phytopathology 154: 386–391.

Schneider B, Seemeider E, Smart CD, Kirkpatrick BC (1995). Phylogenetic classification of plant pathogenic mycoplasma-like organisms or phytoplasmas, In: Razin S, Tully JG  (Eds.), Molecular and Diagnostic Procedures in Mycoplasmology. Academic Press., San Diego, pp. 369-380.

Verdin E, Salar P, Danet JL, Choueiri E, Jreijiri F, El Zammar S, Gelie B, Bove JM, Garnier M (2003). Candidatus Phytoplasma phoenicium sp. nov. a new phytoplasma associated with an emerging lethal disease of almond trees in Lebanon and Iran. International Journal of Systematic Bacteriology 53: 833-838.

Weintraub PG, Beanland Le A (2006). Insect vectors of phytoplasmas. Annual Review of Entomology 51: 91–111.

Zhang YP, Uyemoto JK, Kirkpatrick BC (1998). A small-scale procedure for extracting nucleic acids from woody plants infected with various phytoplasmas for PCR assay. Journal of Virological Methods 71: 45-50.

Zhao Y, Wel W, Lee IM, Shao J, Suo X, Davis RE (2009). Construction of an interactive online phytoplasma classification tool, iPhyClassifier, and its application in analysis of the peach X-disease phytoplasma group (16SrIII). International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology 59: 2582-2593.

Zirak L, Bahar M, Ahoonmanesh A (2010). Molecular Characterization of Phytoplasmas Aasociated with Peach Diseases in Iran. Journal of Phytopathology 158: 105-110.

 

 

 

Identification and molecular characterization of the phytoplasma associated with leaf stunting and yellowing disease in Razavi and North Khorasan provinces

 

Tarighi S. 1*, Dehghan Niri M.2, Ebadi E.3

 

1Associate Professor, Department of Plant Protection, Faculty of Agriculture, Ferdowsi University of Mashhad, Mashhad, Iran.

2Ph.D. Student of plant pathology, Department of Plant Protection, Faculty of Agriculture, Ferdowsi University of Mashhad, Mashhad, Iran.

3Ph.D. Student of plant pathology, Department of Plant Protection, Faculty of Agriculture, Ferdowsi University of Mashhad, Mashhad, Iran.

 

Abstract

In 2017, leaf stunting and yellowing were observed on twigs and branches of stone fruit trees in production regions in Razavi and North Khorasan provinces of Iran. For diagnosis of disease and identification of the causal agent, symptomatic leaf samples were collected in these orchards and were carried to the laboratory. The disease agent was successfully transmitted by grafting from naturally symptomatic samples to peach (Prunus persica) seedlings. Total DNA was extracted from plant samples and indexed by nested PCR using phytoplasma generic primers, P1/P7 and R16F2n/R2. PCR products were sequenced and the nucleotide sequences were compared with those of other phytoplasmas in GenBank and analyzed by virtual restriction fragment length polymorphism (RFLP). The phytoplasmas associated with leaf stunting and yellowing disease in Razavi and North Khorasan provinces were identified as members of the 16SrIX group or Pigeon pea witches broom (Candidatus Phytoplasma phoenicium). This is the first report of leaf stunting and yellowing disease and characterization of associated phytoplasma in these regions.

Keywords: Phytoplasma, molecular analysis, 16SrIX group.



* نویسنده مسئول: سعید طریقی                                                تلفن: 05138805815                              starighi@um.ac.ir Email:

 

[1] Ampliqon

[2]  Gel Documentation

[3]  Bioneer

[4]  Basic local alignment search tool

 

*  Corresponding Author: Tarighi S.           Tel: 05138805815                                            Email:starighi@um.ac.ir

 

Abou-Jawdah Y, Karakashian A, Sobh H, Martini M, Lee IM (2002). An epidemic of almond witches’-broom in Lebanon: classification and phylogenetic relationship of the associated phytoplasma. Plant Disease 86: 477–484.
 
Abou-Jawdah Y, Sobh H, Akkary M (2009). First Report of Almond Witches Broom Phytoplasma (‘Candidatus Phytoplasma Phoenicium’) Causing a Severe Disease on Nectarine and Peach Trees in Lebanon. EPPO Bulletin 39: 94-98.
Ghayeb Zamharir M (2011). Phytoplasmas Associated with Almond Witches’ Broom Disease: An Overview. African Journal of Microbiology Research 5: 6013-6017.
Ghayeb Zamharir M (2014). Molecular Study of a New Disease of Peach in Iran Associated with a Phytoplasma. Advances in Microbiology 2014: 20-24.
Gundersen DE, Lee IM (1996). Ultrasensitive detection of phytoplasmas by nested-PCR assays using two universal primer pairs. Phytopathologia Mediterranea 35:144-151.
Lee IM, Davis RE, Gundersen Rindal DE (2000). Phytoplasmas: phytopathogenic molli-cutes. Annual Review of Microbiology 56: 1593–1597.
Molino Lova M, Quaglino F, Abou-Jawdah Y, Choueiri E, Sobh H, Alma A, Tedeschi R, Casati P, Bianco PA (2011). Identification of new 16SrIX subgroups, -F and -G, among 'Candidatus Phytoplasma phoenicium' strains infecting almond, peach and nectarine in Lebanon. Phytopathologia Mediterranea 50: 273-282.
Quaglino F, Kube M, Jawhari M, Abou-Jawdah Y, Siewert C, Choueiri E, Sobh H, Casati P, Tedeschi R, Lova MM, Alma A, Bianco PA (2015). ‘Candidatus Phytoplasma phoenicium ’associated with almond witches’-broom disease: from draft genome to genetic diversity among strain populations. BMC microbiology 148: 1-15.
Salehi M, Izadpanah K,  Heydarnejad J (2006). Characterization of a new almond witches’ broom phytoplasma in Iran. Journal of Phytopathology 154: 386–391.
Schneider B, Seemeider E, Smart CD, Kirkpatrick BC (1995). Phylogenetic classification of plant pathogenic mycoplasma-like organisms or phytoplasmas, In: Razin S, Tully JG  (Eds.), Molecular and Diagnostic Procedures in Mycoplasmology. Academic Press., San Diego, pp. 369-380.
Verdin E, Salar P, Danet JL, Choueiri E, Jreijiri F, El Zammar S, Gelie B, Bove JM, Garnier M (2003). Candidatus Phytoplasma phoenicium sp. nov. a new phytoplasma associated with an emerging lethal disease of almond trees in Lebanon and Iran. International Journal of Systematic Bacteriology 53: 833-838.
Weintraub PG, Beanland Le A (2006). Insect vectors of phytoplasmas. Annual Review of Entomology 51: 91–111.
Zhang YP, Uyemoto JK, Kirkpatrick BC (1998). A small-scale procedure for extracting nucleic acids from woody plants infected with various phytoplasmas for PCR assay. Journal of Virological Methods 71: 45-50.
Zhao Y, Wel W, Lee IM, Shao J, Suo X, Davis RE (2009). Construction of an interactive online phytoplasma classification tool, iPhyClassifier, and its application in analysis of the peach X-disease phytoplasma group (16SrIII). International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology 59: 2582-2593.
Zirak L, Bahar M, Ahoonmanesh A (2010). Molecular Characterization of Phytoplasmas Aasociated with Peach Diseases in Iran. Journal of Phytopathology 158: 105-110.