تشخیص مولکولی Toxoplasma gondii با استفاده از PCR زمان واقعی در جوجه‌های گوشتی شهر بغداد، عراق

نوع مقاله : مقاله پژوهشی

نویسنده

گروه میکروب‌شناسی، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه بغداد، بغداد، عراق.

چکیده

هدف: Toxoplasma gondii یک انگل تک‌یاخته‌ای داخل‌سلولی است که عامل بیماری توکسوپلاسموز، یک بیماری مهم مشترک بین انسان و حیوان، در سراسر جهان محسوب می‌شود. جوجه‌های گوشتی به دلیل قرار گرفتن در معرض محیط‌های آلوده و نقش آن‌ها در انتقال آلودگی از طریق مواد غذایی، به‌عنوان منابع بالقوه عفونت در نظر گرفته می‌شوند. مطالعه حاضر با هدف شناسایی T. gondii در جوجه‌های گوشتی شهر بغداد با استفاده از روش‌های PCR معمولی و PCR کمی زمان واقعی با رونویسی معکوس (RT-qPCR) انجام شد.
مواد و روش‌ها: در مجموع، 50 نمونه از جوجه‌های گوشتی از بازارهای محلی فروش و کشتار مرغ زنده در مناطق مختلف شهر بغداد، شامل بازارهای ابوغریب، الغزالیه، العدل، الشورجه و جمیله، طی دوره زمانی ژانویه 2026 تا ژوئن 2026 جمع‌آوری شد. نمونه‌های خون در شرایط آسپتیک جمع‌آوری و برای بررسی‌های مولکولی به دانشکده دامپزشکی دانشگاه بغداد منتقل شدند. DNA ژنومی برای انجام PCR معمولی استخراج شد. سپس RNA تام استخراج شد و پس از رونویسی معکوس به cDNA، با استفاده از RT-qPCR و با هدف قرار دادن ژن B1 متعلق به T. gondii مورد بررسی قرار گرفت.
نتایج: PCR معمولی با موفقیت ژن 18S rRNA را تکثیر کرد و محصول مورد انتظار به اندازه 976 جفت‌باز تولید شد که با استفاده از الکتروفورز روی ژل آگارز تأیید گردید. T. gondii در 20 مورد از 50 نمونه خون جوجه‌های گوشتی (40.0%) شناسایی شد، درحالی‌که 30 نمونه (60.0%) در RT-qPCR با هدف قرار دادن ژن B1 برای T. gondii منفی بودند. مقادیر Ct در نمونه‌های مثبت از 5/27 تا 9/41 متغیر بود. تحلیل آماری داده‌ها اختلاف بین نمونه‌های مثبت و منفی را نشان داد (P = 0.0471, P ≤ 0.05).
نتیجه‌گیری: این مطالعه نشان داد که جوجه‌های گوشتی در شهر بغداد ممکن است نقش مهمی در انتقال توکسوپلاسموز داشته باشند و به‌عنوان یک خطر بالقوه برای سلامت عمومی مطرح باشند. PCR در زمان واقعی (Real-Time PCR) به‌عنوان روشی حساس و قابل اعتماد برای تشخیص مولکولی عفونت T. gondii در جوجه‌های گوشتی شناخته شد.

کلیدواژه‌ها

عنوان مقاله [English]

Molecular Detection of Toxoplasma gondii Using Real-Time PCR in Broiler Chickens from Baghdad City, Iraq

نویسنده [English]

  • Rana Mohammed Ibrahim
Department Microbiology, College of Veterinary Medicine, University of Baghdad, Baghdad, Iraq
چکیده [English]

Objective
Toxoplasma gondii is an intracellular protozoan parasite responsible for toxoplasmosis, an important zoonotic disease affecting humans and animals worldwide. Broiler chickens are considered potential sources of infection due to their exposure to contaminated environments and their role in food transmission. The present study aimed to detect T. gondii in broiler chickens in Baghdad city using conventional PCR and reverse transcription quantitative PCR (RT-qPCR) techniques.
Materials and methods
A total of 50 broiler chicken samples were collected from local live chicken selling and slaughtering markets in different areas of Baghdad city, including Abu Ghraib, Al-Ghazaliya, Al-Adl, Al-Shorja, and Jameela markets, during the period from January 2026 to June 2026. Blood samples were collected under aseptic conditions and transferred to the College of Veterinary Medicine, University of Baghdad, for molecular examination. Genomic DNA was extracted for conventional PCR analysis, while total RNA was extracted, reverse-transcribed into cDNA, and analyzed by RT-qPCR targeting the B1 gene of T. gondii.
Results
Conventional PCR successfully amplified the 18S rRNA gene, producing the expected 976 bp amplicon confirmed by agarose gel electrophoresis. T. gondii was identified in 20 of 50 (40.0%) blood samples from broiler chickens, whereas 30 (60.0%) were negative for T. gondii by RT-qPCR targeting of B1 gene. Ct values ranged from 27.5 to 41.9 in the positive samples. The difference between positive and negative samples (P = 0.0471, P ≤ 0.05) was proved by statistical analysis of the data.
Conclusion
The study concluded that broiler chickens in Baghdad city may play an important role in the transmission of toxoplasmosis and represent a potential public health risk. Real-Time PCR was found to be a sensitive and reliable method for molecular detection of T. gondii infection in broiler chickens.


کلیدواژه‌ها [English]

  • broiler chickens
  • health
  • infection
  • Real-Time qPCR
  • Toxoplasma gonidii

مراجع

Abdulwahed, T. K. (2025). Prevalence of Toxoplasma gondii infection in breeders, animals, soil, and cats in Baghdad, Iraq. Journal of Medical Science, Biology, and Chemistry, 2(1), 48–53. https://doi.org/10.69739/jmsbc.v2i1.503
Abdulzahra, A. I., & Abdullah, B. H. (2023). Molecular and serological detection of Toxoplasma gondii in three species of wild birds of Babylon province, middle Iraq. Iraqi Journal of Veterinary Sciences, 37(1), 39–44. https://doi.org/10.33899/ijvs.2022.133394.2219
Abdulzahra, A. I., Saood, A. I., & Farhood, A. T. (2025). Serological detection of Toxoplasma gondii in local duck birds, and Gallus gallus in Basrah Province, Iraq. Baghdad Science Journal, 22(4), 1185–1190. https://doi.org/10.21123/bsj.2024.8884
Adaszyńska-Skwirzyńska, M., Konieczka, P., Bucław, M., Majewska, D., Pietruszka, A., Zych, S., & Szczerbińska, D. (2025). Analysis of the production and economic indicators of broiler chicken rearing in 2020–2023: A case study of a Polish farm. Agriculture, 15(2), Article 139. https://doi.org/10.3390/agriculture15020139
Ahmad, G., Masud, A., Naeem, M., Ghafar, A., Muqaddas, H., Qamar, M. F., Swelum, A. A., Al-Garadi, M. A., Jabir, M. S., & Said, M. B. (2024). Molecular prevalence, phylogeny and hematological impact of Toxoplasma gondii and Plasmodium spp. in common quails from Punjab, Pakistan. PLoS ONE, 19(5), Article e0304179. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0304179
Al-Khanak, M. N., & Salman, S. S. (2021). Genotyping and DNA sequencing of Toxoplasma gondii from women and domestic chickens in the Wasit Province Iraq. Indian Journal of Forensic Medicine & Toxicology, 15(3).
Alanad, A. I., & Abdullah, B. H. (2023). Molecular and serological detection of Toxoplasma gondii in three species of wild birds of Babylon province, middle Iraq. Iraqi Journal of Veterinary Sciences, 37(1), 39–44. https://doi.org/10.33899/ijvs.2022.133394.2219
Apalowo, O. O., Ekunseitan, D. A., & Fasina, Y. O. (2024). Impact of heat stress on broiler chicken production. Poultry, 3(2), 107–128. https://doi.org/10.3390/poultry3020010
Condoleo, R., Santori, D., Sezzi, E., Serra, S., Tonon, S., Eleni, C., Bosco, A., Papa Caminiti, L. N., & Iulietto, M. F. (2024). Comparison of direct and indirect detection of Toxoplasma gondii in ovine using real-time PCR, serological and histological techniques. Animals, 14(10), Article 1432. https://doi.org/10.3390/ani14101432
Farhan, S. M., Adi, Y. A., Alani, Z. K., AlYasari, J. T. O., & AlTimimi, H. M. (2024). Prevalence of Toxoplasma gondii infections in pregnant women and small ruminants: A molecular diagnostic approach. Journal of Angiotherapy, 8(8), 1–6. https://doi.org/10.25163/angiotherapy.889855
Hill, D. E., Sreekumar, C., Jones, J., & Dubey, J. P. (2007). Toxoplasma gondii. In S. Simjee (Ed.), Foodborne diseases (Infectious Disease). Humana Press. https://doi.org/10.1007/978-1-59745-501-5_12
Hraija, B. A., & Abdair, G. M. A. (2025). Serological and molecular phylogeny of Toxoplasma gondii in asymptomatic pregnant women, and association to MTHFR-C677T gene polymorphism in Wasit Province, Iraq. Central Asian Journal of Medical and Natural Science, 6(4), 2131–2144.
Hussein, H. I. J., & Jasim, G. A. (2022). Detection of toxoplasmosis in (free living and industrial) chicken of Qadisiyah province, Iraq. International Journal of Health Sciences, 6(S5), 3162–3171. https://doi.org/10.53730/ijhs.v6nS5.9324
Khabiri, A., Toroghi, R., Mohammadabadi, M., & Tabatabaeizadeh, S. E. (2025). Whole genome sequencing and phylogenetic relative of a pure virulent Newcastle disease virus isolated from an outbreak in northeast Iran. Letters in Applied Microbiology, 78(4), Article ovaf049. https://doi.org/10.1093/lambio/ovaf049
Khan, M. B., Khan, S., Rafiq, K., Khan, S. N., Attaullah, S., & Ali, I. (2020). Molecular identification of Toxoplasma gondii in domesticated and broiler chickens (Gallus domesticus) that possibly augment the pool of human toxoplasmosis. PLoS ONE, 15(4), Article e0232026. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0232026
Kim, M.-J., Park, S. J., & Park, H. (2024). Trend in serological and molecular diagnostic methods for Toxoplasma gondii infection. European Journal of Medical Research, 29(1), Article 520. https://doi.org/10.1186/s40001-024-02055-4
Kochanowsky, J. A., & Koshy, A. A. (2018). Toxoplasma gondii. Current Biology, 28(14), R770–R771. https://doi.org/10.1016/j.cub.2018.05.035
Kowalczyk, M., Sroka, J., & Wójcik-Fatla, A. (2026). Evolution of Toxoplasma gondii detection and genotyping methods. Journal of Parasitology Research, 2026(1), Article 5586858. https://doi.org/10.1155/japr/5586858
Lin, M.-H., Chen, T.-C., Kuo, T.-T., Tseng, C.-C., & Tseng, C.-P. (2000). Real-time PCR for quantitative detection of Toxoplasma gondii. Journal of Clinical Microbiology, 38(11), 4121–4125. https://doi.org/10.1128/jcm.38.11.4121-4125.2000
Liu, K.-L., He, Y.-F., Xu, B.-W., Lin, L.-X., Chen, P., Iqbal, M. K., Mehmood, K., & Huang, S.-C. (2023). Leg disorders in broiler chickens: A review of current knowledge. Animal Biotechnology, 34(9), 5124–5138. https://doi.org/10.1080/10495398.2023.2270000
Lourido, S. (2019). Toxoplasma gondii. Trends in Parasitology, 35(11), 944–945. https://doi.org/10.1016/j.pt.2019.07.001
Mancusi, A., Proroga, Y. T., Giordano, A., Girardi, S., D’Orilia, F., Pinto, R., Sarnelli, P., Rinaldi, L., Capuano, F., & Maurelli, M. P. (2023). First application of a droplet digital PCR to detect Toxoplasma gondii in mussels. Frontiers in Microbiology, 14, Article 1238689. https://doi.org/10.3389/fmicb.2023.1238689
Mohammadabadi, M., Akhtarpoor, A., Khezri, A., Babenko, O., Stavetska, R. V., Tytarenko, I., Ievstafiieva, Y., Buchkovska, V., Slynko, V., & Afanasenko, V. (2024). The role and diverse applications of machine learning in genetics, breeding, and biotechnology of livestock and poultry. Agricultural Biotechnology Journal, 16(4), 413–442. https://doi.org/10.22103/jab.2025.24662.1644
Naeem, M., Rehman, A. U., Habiba, U., Rehman, Z. U., Muqaddas, H., Aqdas, A., Dawoud, T. M., Bourhia, M., Khan, A., & Khan, A. (2025). Molecular prevalence and genetic diversity of Toxoplasma gondii in free ranging Asil hen (Gallus gallus domesticus). Tropical Animal Health and Production, 57(4), Article 179. https://doi.org/10.1007/s11250-025-04426-3
Shahdadnejad, N., Mohammadabadi, M. R., & Shamsadini, M. (2016). Typing of Clostridium perfringens isolated from broiler chickens using multiplex PCR. Genetics in the Third Millennium, 14(4), 4368–4374.
Tainika, B., Şekeroğlu, A., Akyol, A., & Waithaka Ng’ang’a, Z. (2023). Welfare issues in broiler chickens: Overview. World’s Poultry Science Journal, 79(2), 285–329. https://doi.org/10.1080/00439339.2023.2175343
Villar, B. B. D. L. F., Gomes, L. H. F., Portari, E. A., Ramos, C. N. P., Rocha, D. N., Pereira, J. P., de Souza Neves, E., & da Cunha Guida, L. (2023). Real-time PCR in the diagnosis of congenital toxoplasmosis. The Brazilian Journal of Infectious Diseases, 27(5), Article 102804. https://doi.org/10.1016/j.bjid.2023.102804
Zeedan, G. S., Abdalhamed, A. M., Shaapan, R. M., & El-Namaky, A. H. (2022). Rapid diagnosis of Toxoplasma gondii using loop-mediated isothermal amplification assay in camels and small ruminants. Beni-Suef University Journal of Basic and Applied Sciences, 11(1), Article 1. https://doi.org/10.1186/s43088-021-00184-x                     
مجله بیوتکنولوژی کشاورزی
دوره 18، شماره 4
دی 1405
صفحه 649-662

فایل ها

هم رسانی

ارجاع به این مقاله

آمار