بررسی بیان ژن‌های OsWRKY45 و OsAOS2 دخیل در مسیرهای سیگنالی سالیسیلیک اسید و جاسمونیک اسید تحت القای بیماری بلاست برگ و خوشه در برنج

نوع مقاله : مقاله پژوهشی

نویسندگان

1 دانشیار، گروه اصلاح نباتات و بیوتکنولوژی، دانشگاه علوم کشاورزی و منابع طبیعی گرگان ، گرگان، ایران

2 دانشَ آموخته کارشناسی ارشد، گروه اصلاح نباتات و بیوتکنولوژی، دانشگاه علوم کشاورزی و منابع طبیعی گرگان،گرگان، ایران

3 دانش آموخته دکتری ،گروه اصلاح نباتات و بیوتکنولوژی، دانشگاه علوم کشاورزی و منابع طبیعی گرگان، گرگان، ایران

چکیده

برنج ((Oryza sativa بخش اصلی غذای بیش از سه میلیارد نفر از جمعیت دنیاست که درنواحی مختلف کشاورزی در سطح جهان کشت می‌شود. درحالی که عملکرد و کیفیت آن به شدت توسط عوامل بیمارگر در معرض خطر قرار می‌گیرد. بلاست برنج، که به وسیله عامل بیمارگر قارچی M.oryzae ایجاد می‌شود مخرب‌ترین بیماری در برنج است. حدود 10 تا 30 درصد از تولید سالیانه برنج در اثر این بیماری از بین می‌رودپاسخ دفاعی اعمال شده بر علیه اکثر پاتوژن‌ها به طور عمده به وسیله سه مولکول پیام‌رسان، سالیسیلیک اسید، جاسمونیک اسید و اتیلن کنترل می‌شود. یکی از راه‌کارهای موثر در تولید گیاهان مقاوم، اصلاح مسیرهای ژنتیکی انتقال پیام دخیل در مکانیسم دفاعی، از طریق دستکاری ژن‌های کدکننده مولکول‌های پیام‌رسان مرتبط با پروتئین‌های دفاعی به‌دست می‌آید. برای عوامل بیماریزای همی-بیوتروفیک مثل بلاست برنج Magnaporthe oryzae هر دو مسیر سالیسیلیک اسید و جاسمونیک اسید برای مقاومت ضروری است. در این مطالعه میزان تغییر بیان ژن‌های OsWRKY45 و OsAOS2 دخیل در مسیرهای سیگنالی سالیسیلیک اسید و جاسمونیک اسید با استفاده از تکنیک QRT-PCR و محتوای کلروفیل در زمان‌های صفر، 36 و72 ساعت پس از آلودگی در مرحله گیاهچه‌ای leaf blast و خوشه‌دهی neck blast و همچنین صفات مربوط به اجزای مقاومت شامل تعداد لکه اسپورزا، سطح ساقه آلوده و اندازه لکه هفت روز پس از مایه‌زنی با جدایه IC-25 قارچ M.oryzae در مرحله خوشه‌دهی مورد بررسی قرارگرفت. ارقام مورد مطالعه شامل واریته پویا (مقاوم به بلاست) که با استفاده از روش القاء موتاسیون در واریته موسی‌طارم(حساس به بلاست) ایجاد شده که دارای زمینه ژنتیکی یکسان، و پاسخ متفاوت نسبت به بیماری را دارند. ارزیابی اجزای مقاومت نشان داد که واریته پویا متحمل و واریته موسی‌طارم حساس به قارچ در هر دو مرحله گیاهچه‌ای و خوشه‌دهی بودند. بر اساس نتایج مقاومت پس از مایه‌زنی با جدایه IC-25 قارچ M.oryzae، واریته پویا دارای تیپ آلودگی مقاوم و واریته موسی‌طارم حساس بود. نتایج بیان ژن‌‌ها پس از القای بیماری نشان داد که واریته پویا در بیان ژن‌های osAOS2 و osWRKY45 افزایش معنی‌داری نسبت به واریته موسی‌طارم داشته است. از محتوای کلروفیل با گذشت زمان پس از مایه‌زنی کاسته شد، که شدت وسرعت این کاهش در واریته پویا نسبت به موسی طارم بیشتر بود. نتایج ارزیابی بیان ژن حاکی از افزایش بیان ژن‌های مورد مطال عه پس از مایه زنی در هر دو رقم با الگوی متفاوت بود، اما افزایش بیان در واریته پویا نسبت به واریته موسی‌طارم به مقدار بیشتر و در ساعات اولیه آلودگی بوقوع پیوست

کلیدواژه‌ها


عنوان مقاله [English]

Investigating the expression of OsWRKY45 and OsAOS2 genes involved in the signaling pathways of salicylic acid and jasmonic acid under the induction of leaf and spike blast disease in rice

نویسندگان [English]

  • saied navabpour 1
  • Ehsan Norouzi 2
  • Dariush Ebadi 3
1 Associate Professor, Department of Plant Breeding and Biotechnology, Gorgan University of Agricultural Sciences and Natural Resources, Gorgan, Iran
2 Master's student, Department of Plant Breeding and Biotechnology, Gorgan University of Agricultural Sciences and Natural Resources, Gorgan, Iran
3 PhD student, Department of Plant Breeding and Biotechnology, Gorgan University of Agricultural Sciences and Natural Resources, Gorgan, Iran
چکیده [English]

Rice (Oryza sativa) is the main part of the food of more than three billion people of the world, which is cultivated in different agricultural areas worldwide. While its yield and quality are severely threatened by pathogenic factors. Rice Blast, which is caused by the fungal pathogen M. oryzae is the most destructive disease in rice. About 10 to 30% of the annual production of rice is lost due to this disease. The defense response applied against most pathogens is mainly to It is controlled by three messenger molecules, salicylic acid, jasmonic acid and ethylene. One of the effective solutions in producing resistant plants is to modify the genetic pathways of message transmission involved in the defense mechanism, through the manipulation of genes encoding messenger molecules related to proteins. Defense is obtained. For hemi-biotrophic pathogens such as Magnaporthe oryzae rice blast, both salicylic acid and jasmonic acid pathways are necessary for resistance. In this study, the amount of expression changes of OsWRKY45 and OsAOS2 genes involved in salicylic acid and jasmonic signaling pathways acid using QRT-PCR technique and chlorophyll content in time zero, 36 and 72 hours after infection in leaf blast seedling stage and neck blast clustering, as well as traits related to resistance components including the number of spore spots, infected stem surface and spot size seven days after inoculation with IC-25 isolate of M. oryzae It was examined in the clustering stage. The cultivars under study include the dynamic variety (resistant to blast) which was created using the method of mutation induction in the variety Musitaram (sensitive to blast), which have the same genetic background and different response to the disease. The evaluation of the resistance components showed that the dynamic variety was tolerant and the Musitaram variety was susceptible to the fungus in both seedling and clustering stages. Based on the resistance results after inoculation with M. oryzae isolate IC-25, the dynamic variety had a resistant infection type and the Musitaram variety was sensitive. The results of gene expression after disease induction showed that the dynamic variety had a significant increase in the expression of osAOS2 and osWRKY45 genes compared to Musataram variety. The chlorophyll content decreased with the passage of time after seeding, and the intensity and speed of this decrease was higher in the dynamic variety compared to Musa Tarem.

کلیدواژه‌ها [English]

  • salicylic acid
  • jasmunic acid
  • rice blast
  • OsWRKY45
  • OsAOS2
بهادر یاسر، محمد آبادی محمد رضا، خضری  امین، و همکاران (1395) مطالعه تنوع ژنتیکی جمعیت­های زنبور عسل استان کرمان با استفاده از نشانگر­های ISSR، پژوهش­های تولیدات دامی13، 192-186.
جعفری احمدآبادی سید علی اصغر، عسکری­همت حشمت­اله، محمدآبادی محمدرضا، و همکاران (1402) تاثیر شاهدانه بر بیان ژن DLK1 در بافت‌ قلب بره‌های کرمانی. مجله بیوتکنولوژی کشاورزی، 15(1)، 217-234.
عرب پور رق آبادی زهرا، محمدآبادی محمدرضا، خضری امین (1400) الگوی بیانی ژن p32 در بافت‌های ران، دست، راسته و چربی پشت بره کرمانی. مجله بیوتکنولوژی کشاورزی، 13(4)، 183-200.
محمدآبادی محمدرضا (1399) بیان ژن ESR1 در بز کرکی راینی با استفاده از real time PCR‎. مجله بیوتکنولوژی کشاورزی 12(1)، 192-177.
محمدآبادی محمدرضا (1399) پروفایل بیانیmRNA مختص بافت ژن ESR2 در بز. مجله بیوتکنولوژی کشاورزی 12(4)، 184-169.
محمدآبادی محمدرضا، سفلایی محمد (1399). پروفایل بیانی mRNA مختص بافت ژن BMP15 در بز. مجله بیوتکنولوژی کشاورزی 12(3)، 208-191.
محمدآبادی محمدرضا، کرد محبوبه، نظری محمود (1397) مطالعه بیان ژن لپتین در بافت‌های مختلف گوسفند کرمانی با استفاده از real time PCR. مجله بیوتکنولوژی کشاورزی 10(3)، 122-111.
References
Arabpour Z, Mohammadabadi M, Khezri A (2021) The expression pattern of p32 gene in femur, humeral muscle, back muscle and back fat tissues of Kermani lambs. Agric Biotechnol J 13 (4), 183-200 (In Persian).
Cheng H, Liu H, Deng Y, et al. (2015) The WRKY45-2 WRKY13 WRKY42 transcriptional regulatory cascade is required for rice resistance to fungal pathogen. Plant Physiol J 167, 1087-1099.
De-xi C, Xue-w C, Bing-t M, et al. (2010) Genetic transformation of rice with pi-d2 gene enhances resistance to rice blast fungus Magnaporthe oryzae. Rice Sci 17(1), 19–27.
Ebadi AD, Navabpour S, Yamchi A, et al. (2019) Evaluation of Several Important Defense Enzyme Activities in Mutant Rice Resistant to Blast Disease. J Nucl Sci Technol 86, 100-108.
Fernandez J, and Wilson RA (2014) Cells in cells: morphogenetic and metabolic strategies conditioning rice infection by the blast fungus Magnaporthe oryzae. Protoplasma 251, 37–47.
Hao Z N, Wang L P, and Tao R X (2009) Expression patterns of defense genes and antioxidant defence responses in a rice variety that is resistant to leaf blast but susceptible to neck blast. Plant Physiol Biochem 74, 167e174.
Jafari Ahmadabadi SAA, Askari-Hemmat H, Mohammadabadi M, et al. (2023) The effect of Cannabis seed on DLK1 gene expression in heart tissue of Kermani lambs. Agric Biotechnol J 15 (1), 217-234 (In Persian).
Kato-N H (2011) Convergent or parallel molecular evolution of momilactone A and B: Potent allelochemicals, momilactones have been found only in rice and the moss Hypnum plumaeforme. J Plant Physiol 168, 1511–1516.
Kazan K (2015) Diverse roles of jasmonates and ethylene in abiotic stress tolerance. Trend Plant Sci 20, 219-229.
Ke Y, Kang Y, Wu M, et al. (2019) Jasmonic Acid-involved oseds1 signaling in rice-bacteria interactions. Rice 12, e25.
Lin K C, Jwo WS, and Chandrika N (2016) A rice mutant defective in antioxidant-defense system and sodium homeostasis possesses increased sensitivity to salt stress. Biologia Plantarum 60, 86-94.
Liu J, Wang X, and Mitchell T (2010) Recent progress and understanding of the molecular mechanisms of the rice-Magnaporthe oryzae interaction. Mol Plant Pathol 11, 419–27.
Mackill D J, and Bonman J M (1986) New hosts of Pyricularia oryzae. Plant Dis 70, 123-129.
Mackill D J, and Bonman J M) 1992 (Inheritance of blast resistance line of rice. Phytopathology 82, 46-749.
Masoudzadeh SH, Mohammadabadi MR, Khezri A, et al. (2020) Dlk1 gene expression in different Tissues of lamb. Iran J Appl Anim Sci 10 (4), 669-677.
Mei C,Qi M, Sheng G, and Yang Y (2006) Inducible overexpression of a rice allene oxide synthase gene increases the endogenous jasmonic acid level, PR gene expression, and host resistance to fungal infection. Mol Plant-Microbe Interact 19, 1127-1137.
Mohammadabadi M (2021) Tissue-specific mRNA expression profile of ESR2 gene in goat. Agric Biotechnol J 12 (4), 167-181 (In Persian).
Mohammadabadi M, Masoudzadeh SH, Khezri A, et al. (2021) Fennel (Foeniculum vulgare) seed powder increases Delta-Like Non-Canonical Notch Ligand 1 gene expression in testis, liver, and humeral muscle tissues of growing lambs. Heliyon 7 (12), e08542.
Mohammadabadi M, Soflaei M (2020) Tissue-specific mRNA expression profile of BMP15 gene in goat. Agric Biotechnol J 12, 191-208 (In Persian).
Mohammadabadi MR (2020) Expression of ESR1 gene in Raini Cashmere goat using Real Time PCR. Agric Biotechnol J 12 (1), 177-192 (In Persian).
Mohammadabadi MR, Kord M, Nazari M (2018) Studying expression of leptin gene in different tissues of Kermani Sheep using Real Time PCR. Agric Biotechnol J 10, 111-122 (In Persian).
  Mutuku M, Yoshida S, Shimizu T, Ichihashi Y, Wakatake T, Takahashi A, Seo M, and Shirasu K (2015) The WRKY45-dependent signaling pathway is required for resistance against Striga parasitism. Plant Physiol Preview 114, 256-304.
 Nakayama A, Fukushima S,Goto S, et al. (2013) Genome-wide identification of WRKY45-regulated genes that mediate benzothiadiazole-induced defense responses in rice. BMC Plant Biol 13, e150.
Pfaffl MW (2001) A new mathematical model for relative quantification in real-time RT–PCR. Nucleic Acids Res 29(9), 45-45.
Porra RJ, Thompson WA, Kriedmann PE (1989) Determination of accurate extinction coefficients and simultaneous equations for assaying chlorophylls a and b extracted with four different solvents: vertification of the concentration of chlorophyll standards by atomic absorption spectroscopy. Biochimica et Biophysica Acta 975, 384-394
Riemann M, Haga K, Shimizu T, et al. (2013) Identification of rice Allene Oxide Cyclase mutants and the function of jasmonate for defence against Magnaporthe oryzae. Plant J 74, 226-238.
Safaei SMH, Dadpasand M, Mohammadabadi M, et al. (2022) An Origanum majorana Leaf Diet Influences Myogenin Gene Expression, Performance, and Carcass Characteristics in Lambs. Animals 13 (1), e14.
Shahsavari M, Mohammadabadi M, Khezri A, et al. (2021) Correlation between insulin-like growth factor 1 gene expression and fennel (Foeniculum vulgare) seed powder consumption in muscle of sheep. Anim Biotechnol 33, 1-11.
Shahsavari M, Mohammadabadi M, Khezri A, et al. (2022) Effect of Fennel (Foeniculum Vulgare) Seed Powder Consumption on Insulin-like Growth Factor 1 Gene Expression in the Liver Tissue of Growing Lambs. Gene Express 21(2), 21-26.
Sharma N, Rahman M H, Strelkov S, et al. (2007) Proteome-level changes in two Brassica napus lines exhibiting differential responses to fungal pathogen Alternaria brassicae. Plant Sci 172, 95-110.
Shimono M, Koga H, Akagi A, et al. (2012) Rice WRKY45 plays important roles in fungal and bacterial disease resistance. Mol Plant Pathol J 13(1), 83–94
Shimono M, Sugano S, Nakayama A, et al. (2007) Rice WRKY45 plays a crucial role in benzothiadiazole-inducible blast resistance. Plant Cell 19, 2064–2076.
Takatsuji H (2014) Development of disease-resistant rice using regulatory components of induced disease resistance. Front Plant Sci 5, e630.
Takatsuji H, Hayashi N (2017) Broad-Spectrum blast resistance: harnessing a natural allele of a transcription factor in rice. Mol Plant 10, 1144–1146
Uji Y, Kashihara K, Kiyama H, et al. (2019) Jasmonic acid-induced VQ-motif-containing protein OsVQ13 influences the OsWRKY45 signaling pathway and grain size by associating with OsMPK6 in rice. Inter J Mol Sci 20, e2917
Wang P, Li C, Wang Y,et al. (2014) Identification of a geranylgeranyl reductase gene for chlorophyll synthesis in rice. Springerplus 3, e201
Wani A A, and Anis M (2008) Gamma ray-and EMS-induced bold-seeded high-yielding mutants in chickpea (Cicer arietinum L.). TÜBİTAK J 32, 161-166.
Wei T, Ou B, Li J, et al. (2013) Transcriptional profiling of rice early response to Magnaporthe Oryzae identified oswrkys as importan regulators in rice blast resistance. PLoS ONE 8(3), e59720.
Xie X Z, Xue Y J, Zhou J J, et al. (2011) Phytochromes regulate SA and JA signaling pathways in rice and are required for developmentally controlled resistance to Magnaporthe grisea. Mol Plant 4, e688-696.
Yamada S,Kano A, Tamaoki D, et al. (2012( Involvement of OsJAZ8 in jasmonate-induced resistance to bacterial blight in rice. Plant Cell Physiol 53, 2060-2072
Zhang KL, Liu QS, Kang HX, et al. (2020) Herbivore-induced rice resistance against rice blast mediated by salicylic acid. Insect Sci 27(1), 49-57.‏
Kazemi G, Navabpour S, Ramezanpour SS (2010) Evaluation of catalase gene expression and morphological traits in two wheat cultivar under salt stress. Modern Genet J 1, 79-87 (In Persian).